背景及概述[1][2]
8-異戊烯基柚皮素(8-Prenylnaringenin，簡(jiǎn)稱(chēng)8PN)是啤酒花中發(fā)現(xiàn)的一種具有雌激素作用的異戊烯基黃酮，文獻(xiàn)報(bào)道8PN是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最具潛力的植物雌性激素。體內(nèi)外研究表明8PN具有較強(qiáng)的雌激素作用，在低劑量下就能發(fā)揮功效，較已發(fā)現(xiàn)的大豆異黃酮、金雀異黃素等植物雌激素的作用都要強(qiáng)，可有效減緩婦女絕經(jīng)期的各種癥狀，而且副作用弱，被認(rèn)為是取代激素代替治療法(Hormone Replacement Therapy，HRT)的一種新型植物雌性激素。除了雌激素作用外，8-異戊烯基柚皮素還具有預(yù)防癌癥、防止骨質(zhì)疏松、抑制血管增生、抗氧化等其他功效。
制備[1]
8-異戊烯基柚皮素在實(shí)際生產(chǎn)中來(lái)源主要有兩類(lèi)，一類(lèi)是直接提取法，另一類(lèi)是化學(xué)合成法。酒花是8-異戊烯基柚皮素的主要來(lái)源，因此，早期8-異戊烯基柚皮素的制備大多采用從酒花中直接提取的方法獲得。然而，8-異戊烯基柚皮素在酒花中的含量極低，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道1kg酒花中僅含10-100mg。用直接提取法原料消耗量大，成本高，所得到的8-異戊烯基柚皮素雜質(zhì)含量比較高，且不易除去，無(wú)法滿足商業(yè)需要。
目前以異黃腐酚或柚皮素為底物，經(jīng)過(guò)化學(xué)合成方法制備的8-異戊烯基柚皮素較多地應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐?；瘜W(xué)合成法制備8PN效果較好，但存在操作復(fù)雜、污染大、安全性低、需要保護(hù)基團(tuán)、專(zhuān)一性較差等缺點(diǎn)，這限制了其在實(shí)際中的應(yīng)用。
CN201010592602.2提供了一種微生物細(xì)胞轉(zhuǎn)化合成8-異戊烯基柚皮素的方法，利用爪哇正青霉將異黃腐酚經(jīng)生物轉(zhuǎn)化合成8-異戊烯基柚皮素，該方法具有操作簡(jiǎn)單、轉(zhuǎn)化條件溫和，效率高、安全性好、成本低等特點(diǎn)。本發(fā)明所使用的爪哇正青霉(Eupenicillium javanicum)購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，編號(hào)為CGMCC NO.3.5706。一種微生物細(xì)胞催化異黃腐酚合成8-異戊烯基柚皮素的方法，包括：
(1)向培養(yǎng)液中接入爪哇正青霉(Eupenicillium javanicum)CGMCC NO.3.5706，得到預(yù)反應(yīng)體系；
(2)向步驟(1)得到的預(yù)反應(yīng)體系中加入異黃腐酚溶液，于25-30℃，優(yōu)選28℃，轉(zhuǎn)化反應(yīng)5-7天，優(yōu)選6天，得到轉(zhuǎn)化后的培養(yǎng)液；其中，異黃腐酚用量以每升培養(yǎng)液計(jì)為0.01-0.1g，優(yōu)選0.02g；
(3)轉(zhuǎn)化后的培養(yǎng)液經(jīng)后處理得到8-異戊烯基柚皮素。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明方法能有效合成8-異戊烯基柚皮素，8-異戊烯基柚皮素轉(zhuǎn)化率高，與現(xiàn)有的直接提取法或化學(xué)合成法相比，具有周期短、操作簡(jiǎn)便、易于控制、安全可靠、成本低廉、專(zhuān)一性好等特點(diǎn)，為工業(yè)化生產(chǎn)8-異戊烯基柚皮素提供了理論依據(jù)和技術(shù)前提，同時(shí)為解決8-異戊烯基柚皮素的工業(yè)化生產(chǎn)難題提供了新思路。
檢測(cè)方法[2]
一種同步檢測(cè)啤酒花中黃腐酚、異黃腐酚和8-異戊烯基柚皮素的方法，包括步驟：
(1)待測(cè)樣品的預(yù)處理：用有機(jī)溶劑提取含啤酒花的待測(cè)樣品，過(guò)濾，所得濾液用有機(jī)溶劑定容，獲得樣品待測(cè)液；
(2)RP-HPLC-紫外檢測(cè)：采用反相碳十八色譜柱和紫外可見(jiàn)分光檢測(cè)器，流動(dòng)相為乙腈和水相的混合溶液，流速為0.7ml/min～1.0ml/min，采用梯度洗脫，在雙檢測(cè)波長(zhǎng)350nm～390nm和260nm～290nm分析樣品待測(cè)液，得到樣品待測(cè)液的色譜圖；所述的水相為甲酸質(zhì)量百分比濃度為0.5％～1.5％的甲酸水溶液。
(3)將樣品待測(cè)液的色譜圖上的峰面積在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上回歸，計(jì)算樣品待測(cè)液中黃腐酚、異黃腐酚和8-異戊烯基柚皮素的含量。
圖1為黃腐酚濃度為40mg/L、異黃腐酚濃度為10mg/L且8-異戊烯基柚皮素濃度為10mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)待試液在370nm檢測(cè)波長(zhǎng)和288nm檢測(cè)波長(zhǎng)的高效液相色譜圖；縱坐標(biāo)：峰吸收強(qiáng)度，橫坐標(biāo)：保留時(shí)間(分鐘)；圖2為啤酒花提取物樣品在370nm檢測(cè)波長(zhǎng)和288nm檢測(cè)波長(zhǎng)的高效液相色譜圖；縱坐標(biāo)：峰吸收強(qiáng)度，橫坐標(biāo)：保留時(shí)間(分鐘)。
應(yīng)用[3]
CN201410460743.7提供一種主要含有黃腐酚、異黃腐酚、8-異戊烯基柚皮素、6-異戊烯基柚皮素、α-酸及β-酸的啤酒花天然藥物組合物(以下簡(jiǎn)稱(chēng)啤酒花組合物)，該組合物是首次從?？浦参锲【苹ㄖ兴@得；首次經(jīng)進(jìn)一步體外實(shí)驗(yàn)研究證明了本發(fā)明組合物具有抑制脂肪酶的活性，該組合物具有在制備抑制脂肪酶作用的藥物中的新用途。
主要參考資料
[1] CN201010592602.2 微生物細(xì)胞催化異黃腐酚合成8-異戊烯基柚皮素的方法
[2] CN201010187676.8 同步檢測(cè)啤酒花中黃腐酚、異黃腐酚和8-異戊烯基柚皮素的方法
[3]CN201410460743.7 啤酒花天然藥物組合物的制備方法及新用途