背景[1-5]
大鼠卵巢顆粒細胞提取物是從大鼠原代卵巢顆粒細胞提取的，大鼠原代卵巢顆粒細胞從正常大鼠卵巢組織制備?？梢灾苯佑糜诨蚩寺。磉_圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。大鼠卵巢顆粒細胞分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動物有兩個卵巢，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結(jié)構(gòu)，而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機能。
卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成；髓質(zhì)位于中央，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng)。卵巢顆粒細胞是卵巢的主要功能細胞，其增殖與分化直接影響著卵泡的生長啟動、發(fā)育、排卵、黃體形成以及甾體激素分泌等卵巢功能活動。
卵巢顆粒細胞是卵泡內(nèi)的細胞群，也是主要的功能細胞，卵泡發(fā)育的顯著標志之一就是顆粒細胞迅速生長及增殖，而成年動物的卵泡閉鎖主要是由顆粒細胞凋亡引起，尤其在卵泡發(fā)育后期，此外，顆粒細胞還與卵泡膜細胞共同完成卵巢激素的合成，維持著有利于卵母細胞生長和成熟的微環(huán)境。細胞形狀呈圓形或橢圓形。
應(yīng)用[6][7]
大鼠卵巢顆粒細胞提取物可用于Reg IV在PCOS模型大鼠卵巢中的表達及對顆粒細胞作用機制的研究：
多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是女性最常見的內(nèi)分泌紊亂性疾病，臨床特征為持續(xù)無排卵、高雄激素血癥以及超聲下見卵巢呈多囊樣改變，其發(fā)生糖尿病、高血壓、心血管疾病及子宮內(nèi)膜癌的風險增加。在閉經(jīng)患者中約占30%，在月經(jīng)稀少和排卵功能障礙性不孕患者中可高達90%。目前，該病機制仍不是很清楚。有研究認為卵泡生長發(fā)育異常可能是引起PCOS不排卵及臨床內(nèi)分泌改變的病理基礎(chǔ)，而內(nèi)在性的卵泡發(fā)育異?？赡芘c卵巢顆粒細胞的凋亡調(diào)控失常有關(guān)。
此外，卵巢顆粒細胞的增殖和凋亡與卵泡的發(fā)育成熟及閉鎖密切相關(guān)，多種調(diào)控因子參與顆粒細胞增殖和凋亡的過程。再生基因Reg家族，屬鈣依賴性凝集素超家族(calcium-dependentlectin superfamily)，代表一組小分子、多功能的分泌性蛋白。1984年由法國人Keim首先在急性胰腺炎的大鼠胰液中發(fā)現(xiàn)，其功能相當于急性反應(yīng)蛋白和胰腺β細胞、神經(jīng)細胞以及消化系統(tǒng)上皮細胞等的抗凋亡因子或生長因子。
根據(jù)Reg基因編碼蛋白的一級結(jié)構(gòu)，Reg家族可分為4個亞型：I、II、III和IV。主要參與組織損傷、炎癥及糖尿病和腫瘤的發(fā)生。Reg IV基因作為Reg基因家族的新成員，由Hanupee等于2001年在研究炎癥性腸病時首次分離篩選鑒定并報道。該基因定位于1號染色體(1q12-q21)，由17496個堿基對構(gòu)成，包含6個外顯子和5個內(nèi)含子。其蛋白相對分子質(zhì)量約17kDa。大量研究表明Reg IV參與細胞的增殖、凋亡、再生和炎性、化生反應(yīng)，并與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。然而對于Reg IV的生物學功能的研究還不是很透徹，它是否在卵巢中表達并參與卵泡的發(fā)育以及顆粒細胞的凋亡和增殖等都未見任何報導。
因此，本研究首先通過免疫組織化學染色、定量RT-PCR以及Western blot分析觀察Reg IV在正常和PCOS模型大鼠卵巢的表達情況，以探討Reg IV是否與PCOS的發(fā)病相關(guān)。此外，Reg IV觸發(fā)的信號通路、靶點、與其它級聯(lián)的交叉以及與其它因子的相互作用和影響仍不清楚，所以我們接著采用大鼠卵巢顆粒細胞體外培養(yǎng)的方法，研究外源性的Reg IV蛋白對顆粒細胞增殖與凋亡的影響，并應(yīng)用小分子RNA干擾技術(shù)抑制Reg IV表達，進一步探討Reg IV對EGFR/Akt及IGF-I/Akt信號通路及凋亡相關(guān)基因Bax和Bcl-2表達的影響。
參考文獻
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[7]杜芳.Reg IV在PCOS模型大鼠卵巢中的表達及對顆粒細胞作用機制的初步探討[D].重慶醫(yī)科大學,2013.