引言：cGAS-STING 通路關(guān)鍵第二信使的定量需求
2‘3’-cGAMP（2‘3’-環(huán)磷酸鳥苷-腺苷）是哺乳動物細胞質(zhì)內(nèi) DNA 感受器 cGAS 被異常 DNA 激活后合成的第二信使，能夠以納摩爾級親和力結(jié)合 STING 蛋白，啟動 I 型干擾素和促炎性細胞因子的表達。該分子在抗病毒免疫、抗腫瘤免疫、自身炎癥性疾病及細胞衰老等多種生理病理過程中發(fā)揮核心調(diào)控作用。準(zhǔn)確檢測細胞、血漿、血清及組織樣本中 2‘3’-cGAMP 的濃度，對于理解 cGAS-STING 通路的激活狀態(tài)、評估候選藥物的靶向調(diào)控效果以及探索疾病生物標(biāo)志物具有重要意義。
由艾美捷代理Cayman 公司推出的 2‘3’-cGAMP ELISA 試劑盒（貨號：501700）是一種競爭性酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，專用于細胞裂解液、血漿、血清和組織樣本中?2‘3’-cGAMP 的定量分析。該試劑盒檢測范圍寬（6.1 pg/ml - 100 ng/ml），靈敏度高（80% B/B? 約 85 pg/ml），可覆蓋從健康基線到強激活狀態(tài)下的濃度區(qū)間。本文將從產(chǎn)品描述、檢測原理、技術(shù)規(guī)格、樣本處理及使用注意事項等方面對該試劑盒進行系統(tǒng)性介紹。
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產(chǎn)品描述與檢測原理
2‘3’-cGAMP ELISA 試劑盒采用競爭性酶免疫分析（EIA）原理。微孔板中預(yù)包被有抗 2‘3’-cGAMP 抗體。檢測時，將標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本與固定量的酶標(biāo)抗原（2’3‘-cGAMP-乙酰膽堿酯酶結(jié)合物）共同加入孔中。樣本中的游離 2’3‘-cGAMP 與酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合抗體上的有限結(jié)合位點。洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入 Ellman’s 試劑（含乙酰硫代膽堿和顯色劑）。結(jié)合在孔板上的酶標(biāo)抗原催化底物水解生成黃色產(chǎn)物，在 412 nm 處產(chǎn)生特征吸收峰。樣本中 2‘3’-cGAMP 濃度越高，競爭占據(jù)的抗體位點越多，最終結(jié)合的酶標(biāo)抗原越少，顯色越淺，吸光度越低。通過已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（吸光度 vs. 濃度，四參數(shù)邏輯擬合），即可計算待測樣本中 2‘3’-cGAMP 的含量。
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技術(shù)規(guī)格
參數(shù)?詳細信息
檢測方法?競爭性酶免疫分析（EIA）
樣本類型?細胞裂解液、血漿、血清、組織樣本
檢測范圍?6.1 pg/ml - 100 ng/ml（9 pM - 148.3 nM）
中點（50% B/B?） 約 900 pg/ml（1,335 pM）
靈敏度（80% B/B?） 約 85 pg/ml（126 pM）
檢測限（LOD） 9.6 pg/ml（14.2 pM）
抗體來源?動物來源（牛、兔）
儲存溫度?4°C
運輸條件?美國大陸地區(qū)濕冰運輸；其他地區(qū)可能不同
許可/合作方 BIOLOG Life Science Institute
警告?不適用于人類或獸醫(yī)用途
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樣本類型與前處理建議
適用樣本類型
細胞裂解液：貼壁或懸浮細胞經(jīng)?PBS 洗滌后，使用裂解緩沖液（如 RIPA 或試劑盒推薦的裂解液）裂解，離心取上清。建議測定蛋白濃度以進行歸一化（如 pg 2‘3’-cGAMP/mg 總蛋白）。
血漿：使用?EDTA、肝素或檸檬酸鈉抗凝采血，離心分離血漿。避免溶血，溶血樣本可能釋放細胞內(nèi)的 cGAMP 導(dǎo)致結(jié)果偏高。
血清：全血自然凝固后離心獲得血清。注意血清中可能含有較低水平的?cGAMP，需設(shè)置相應(yīng)基質(zhì)對照。
組織樣本：勻漿后離心取上清。建議在裂解緩沖液中加入蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑，減少樣本降解。
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樣本前處理注意事項
1. 基質(zhì)效應(yīng)：不同樣本基質(zhì)（如血漿蛋白、脂質(zhì)、裂解液成分）可能影響抗體結(jié)合效率。建議對標(biāo)準(zhǔn)品使用與待測樣本相同或相似的稀釋液（如試劑盒提供的緩沖液或基質(zhì)匹配的空白裂解液）。
2. 稀釋方案：若樣本濃度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線上限（>100 ng/ml），建議用試劑盒提供的樣本稀釋緩沖液進行 2-100 倍稀釋后重新檢測，并將結(jié)果乘以稀釋因子。若濃度低于檢測下限（<9.6 pg/ml），可報告為“低于檢測限”或通過濃縮樣本提高檢測能力。
3. 穩(wěn)定性：樣本收集后應(yīng)盡快檢測或分裝后儲存于 -80°C。避免反復(fù)凍融，以免 2‘3’-cGAMP 降解。
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儲存與運輸要求
儲存溫度：4°C。所有組分（包括包被板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗原、緩沖液、Ellman’s 試劑等）均應(yīng)于 4°C 冷藏保存。請勿冷凍，冷凍可能導(dǎo)致抗體失活或試劑分層。
運輸條件：美國大陸地區(qū)采用濕冰運輸；其他地區(qū)可能有所不同。收貨后請立即檢查包裝完整性，并按說明書要求將各組分轉(zhuǎn)移至?4°C。
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應(yīng)用領(lǐng)域
應(yīng)用領(lǐng)域?說明
cGAS-STING 通路激活狀態(tài)評估 定量檢測細胞或組織中內(nèi)源性 2‘3’-cGAMP 水平，反映 cGAS 活性
藥物篩選?評估?cGAS 抑制劑、STING 激動劑/拮抗劑對 2‘3’-cGAMP 產(chǎn)生的影響
病毒感染研究?監(jiān)測?DNA 病毒（如 HSV、HPV、VACV）感染后細胞中 cGAMP 的動態(tài)變化
腫瘤免疫與放療/化療 檢測放療、化療或免疫治療后腫瘤組織中 cGAMP 的誘導(dǎo)水平
自身炎癥疾病模型?測量?cGAS 過度激活相關(guān)疾?。ㄈ?Aicardi-Goutières 綜合征）模型中的 cGAMP 濃度
生物標(biāo)志物開發(fā)?探索血漿/血清中 2‘3’-cGAMP 作為疾病活動度或治療應(yīng)答的生物標(biāo)志物
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部分文獻參考：
Fréreux, C., Karam, J.A.Q., Howley, B.V., et al. PCBP1 binding to single-stranded poly-cytosine motifs enhances cGAS sensing and impairs breast cancer development. Commun. Biol. 9(1), 179 (2026).
Fréreux, C., and Howe, P.H. ELISA-based enzyme kinetics assay for measuring cGAS activity. Bio. Protoc. 16(7), e5655 (2026).
Chen, M., Li, Y., Zhu, J.-Y., et al. Exercise-induced adipokine Nrg4 alleviates MASLD by disrupting hepatic cGAS-STING signaling. Cell Rep. 44(2), 115251 (2025).
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