引言：cGAS-STING 通路關鍵第二信使的定量需求
2‘3’-cGAMP（2‘3’-環(huán)磷酸鳥苷-腺苷）是哺乳動物細胞質內 DNA 感受器 cGAS 被異常 DNA 激活后合成的第二信使，能夠以納摩爾級親和力結合 STING 蛋白，啟動 I 型干擾素和促炎性細胞因子的表達。該分子在抗病毒免疫、抗腫瘤免疫、自身炎癥性疾病及細胞衰老等多種生理病理過程中發(fā)揮核心調控作用。準確檢測細胞、血漿、血清及組織樣本中 2‘3’-cGAMP 的濃度，對于理解 cGAS-STING 通路的激活狀態(tài)、評估候選藥物的靶向調控效果以及探索疾病生物標志物具有重要意義。
由艾美捷代理Cayman 公司推出的 2‘3’-cGAMP ELISA 試劑盒（貨號：501700）是一種競爭性酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，專用于細胞裂解液、血漿、血清和組織樣本中?2‘3’-cGAMP 的定量分析。該試劑盒檢測范圍寬（6.1 pg/ml - 100 ng/ml），靈敏度高（80% B/B? 約 85 pg/ml），可覆蓋從健康基線到強激活狀態(tài)下的濃度區(qū)間。本文將從產品描述、檢測原理、技術規(guī)格、樣本處理及使用注意事項等方面對該試劑盒進行系統(tǒng)性介紹。
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產品描述與檢測原理
2‘3’-cGAMP ELISA 試劑盒采用競爭性酶免疫分析（EIA）原理。微孔板中預包被有抗 2‘3’-cGAMP 抗體。檢測時，將標準品或待測樣本與固定量的酶標抗原（2’3‘-cGAMP-乙酰膽堿酯酶結合物）共同加入孔中。樣本中的游離 2’3‘-cGAMP 與酶標抗原競爭結合抗體上的有限結合位點。洗滌去除未結合物質后，加入 Ellman’s 試劑（含乙酰硫代膽堿和顯色劑）。結合在孔板上的酶標抗原催化底物水解生成黃色產物，在 412 nm 處產生特征吸收峰。樣本中 2‘3’-cGAMP 濃度越高，競爭占據的抗體位點越多，最終結合的酶標抗原越少，顯色越淺，吸光度越低。通過已知濃度的標準品繪制標準曲線（吸光度 vs. 濃度，四參數(shù)邏輯擬合），即可計算待測樣本中 2‘3’-cGAMP 的含量。
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技術規(guī)格
參數(shù)?詳細信息
檢測方法?競爭性酶免疫分析（EIA）
樣本類型?細胞裂解液、血漿、血清、組織樣本
檢測范圍?6.1 pg/ml - 100 ng/ml（9 pM - 148.3 nM）
中點（50% B/B?） 約 900 pg/ml（1,335 pM）
靈敏度（80% B/B?） 約 85 pg/ml（126 pM）
檢測限（LOD） 9.6 pg/ml（14.2 pM）
抗體來源?動物來源（牛、兔）
儲存溫度?4°C
運輸條件?美國大陸地區(qū)濕冰運輸；其他地區(qū)可能不同
許可/合作方 BIOLOG Life Science Institute
警告?不適用于人類或獸醫(yī)用途
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樣本類型與前處理建議
適用樣本類型
細胞裂解液：貼壁或懸浮細胞經?PBS 洗滌后，使用裂解緩沖液（如 RIPA 或試劑盒推薦的裂解液）裂解，離心取上清。建議測定蛋白濃度以進行歸一化（如 pg 2‘3’-cGAMP/mg 總蛋白）。
血漿：使用?EDTA、肝素或檸檬酸鈉抗凝采血，離心分離血漿。避免溶血，溶血樣本可能釋放細胞內的 cGAMP 導致結果偏高。
血清：全血自然凝固后離心獲得血清。注意血清中可能含有較低水平的?cGAMP，需設置相應基質對照。
組織樣本：勻漿后離心取上清。建議在裂解緩沖液中加入蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑，減少樣本降解。
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樣本前處理注意事項
1. 基質效應：不同樣本基質（如血漿蛋白、脂質、裂解液成分）可能影響抗體結合效率。建議對標準品使用與待測樣本相同或相似的稀釋液（如試劑盒提供的緩沖液或基質匹配的空白裂解液）。
2. 稀釋方案：若樣本濃度超出標準曲線上限（>100 ng/ml），建議用試劑盒提供的樣本稀釋緩沖液進行 2-100 倍稀釋后重新檢測，并將結果乘以稀釋因子。若濃度低于檢測下限（<9.6 pg/ml），可報告為“低于檢測限”或通過濃縮樣本提高檢測能力。
3. 穩(wěn)定性：樣本收集后應盡快檢測或分裝后儲存于 -80°C。避免反復凍融，以免 2‘3’-cGAMP 降解。
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儲存與運輸要求
儲存溫度：4°C。所有組分（包括包被板、標準品、酶標抗原、緩沖液、Ellman’s 試劑等）均應于 4°C 冷藏保存。請勿冷凍，冷凍可能導致抗體失活或試劑分層。
運輸條件：美國大陸地區(qū)采用濕冰運輸；其他地區(qū)可能有所不同。收貨后請立即檢查包裝完整性，并按說明書要求將各組分轉移至?4°C。
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應用領域
應用領域?說明
cGAS-STING 通路激活狀態(tài)評估 定量檢測細胞或組織中內源性 2‘3’-cGAMP 水平，反映 cGAS 活性
藥物篩選?評估?cGAS 抑制劑、STING 激動劑/拮抗劑對 2‘3’-cGAMP 產生的影響
病毒感染研究?監(jiān)測?DNA 病毒（如 HSV、HPV、VACV）感染后細胞中 cGAMP 的動態(tài)變化
腫瘤免疫與放療/化療 檢測放療、化療或免疫治療后腫瘤組織中 cGAMP 的誘導水平
自身炎癥疾病模型?測量?cGAS 過度激活相關疾?。ㄈ?Aicardi-Goutières 綜合征）模型中的 cGAMP 濃度
生物標志物開發(fā)?探索血漿/血清中 2‘3’-cGAMP 作為疾病活動度或治療應答的生物標志物
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部分文獻參考：
Fréreux, C., Karam, J.A.Q., Howley, B.V., et al. PCBP1 binding to single-stranded poly-cytosine motifs enhances cGAS sensing and impairs breast cancer development. Commun. Biol. 9(1), 179 (2026).
Fréreux, C., and Howe, P.H. ELISA-based enzyme kinetics assay for measuring cGAS activity. Bio. Protoc. 16(7), e5655 (2026).
Chen, M., Li, Y., Zhu, J.-Y., et al. Exercise-induced adipokine Nrg4 alleviates MASLD by disrupting hepatic cGAS-STING signaling. Cell Rep. 44(2), 115251 (2025).
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