牛附紅細(xì)胞體（牛嗜血支原體）探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 牛附紅細(xì)胞體（牛嗜血支原體）探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Eperythrozoon bovis Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5253 |
實驗原理
基于探針法熒光定量PCR技術(shù)，通過特異性引物和探針靶向牛附紅細(xì)胞體（Eperythrozoon wenyoni）保守序列，實現(xiàn)高靈敏度（可達(dá)幾百拷貝/反應(yīng)）和特異性檢測，避免交叉污染。
試劑盒組成
反應(yīng)液A-TSV-I：含PCR緩沖液、dNTPs、Mg2?等。
酶混合液（B-I+R-I）：含熱啟動DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶（若需）。
陽性對照：1×10?拷貝/μL牛嗜血支原體DNA。
陰性對照：無核酸酶水。
操作步驟
1. 樣本制備
使用配套DNA提取試劑盒或自選方法提取樣本DNA，建議設(shè)置N+2個樣本（含陰性/陽性對照）。
陽性對照（PC）：取10μL 1×10?拷貝/μL稀釋液；陰性對照（NC）：使用無核酸酶水。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（定量檢測需選）
將陽性對照梯度稀釋（10?至102拷貝/μL），每個濃度分裝后冰上保存。
3. PCR反應(yīng)體系配制（20μL/管）
| 成分 | 體積（μL） |
| 反應(yīng)液A-TSV-I | 17.0 |
| 酶混合液（B-I+R-I） | 1.0 |
| 模板DNA | 2.0 |
4. 擴增程序
恒溫?zé)晒鈨x：63℃反應(yīng)60分鐘。
熒光定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 3分鐘；
循環(huán)：95℃ 15秒 → 63℃ 45秒（收集FAM熒光），共60循環(huán)。
結(jié)果判讀
定量分析：以陽性對照log濃度為橫軸、Ct值為縱軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣本濃度。
定性分析：
陽性：Ct值≤36，典型S型擴增曲線；
陰性：Ct值≥40或無擴增；
可疑（36<Ct<40）：需復(fù)測。
注意事項
分區(qū)操作：樣本制備、試劑配制、擴增需在不同區(qū)域進行。
避免污染：使用一次性耗材，實驗后以10%次氯酸或75%酒精清潔臺面。
質(zhì)量控制：陰性對照Ct值應(yīng)≥40，陽性對照Ct值≤36。
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關(guān)鍵字： 牛附紅細(xì)胞體（牛嗜血支原體）;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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