預期用途
本試劑盒基于SYBR Green I熒光染料法，通過實時熒光定量PCR技術特異性檢測產(chǎn)酸克雷伯菌的核酸（如16S rRNA或特異性基因片段），適用于臨床樣本、環(huán)境樣本或培養(yǎng)物的快速檢測。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)酸克雷伯菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Klebsiella oxytoca Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR3968 |
檢測原理
特異性引物：針對產(chǎn)酸克雷伯菌保守序列設計引物，擴增目標DNA。
熒光信號：SYBR Green I染料與雙鏈DNA結合后發(fā)射熒光，通過儀器實時監(jiān)測擴增曲線。
定量分析：通過Ct值與標準曲線對比，計算樣本中目標基因的拷貝數(shù)。
組分列表
| 組分名稱 | 規(guī)格（50T） | 儲存條件 |
| qPCR預混液（含SYBR Green I） | 1 mL × 2管 | -20℃避光 |
| 產(chǎn)酸克雷伯菌引物混合液 | 100 μL × 1管 | -20℃ |
| 陽性對照（產(chǎn)酸克雷伯菌DNA） | 50 μL × 1管 | -20℃ |
| 陰性對照（無核酸水） | 1 mL × 1管 | 室溫 |
| DNase/RNase-Free水 | 1 mL × 1管 | 室溫 |
儲存與穩(wěn)定性
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
有效期：12個月。
實驗步驟
1. 樣本DNA提取
使用商品化DNA提取試劑盒（如TIANamp細菌DNA Kit）處理樣本。
2. qPCR反應體系配制
| 組分 | 體積（μL） |
| qPCR預混液 | 10 |
| 引物混合液 | 1 |
| 模板DNA | 2 |
| DNase-Free水 | 補至20 μL |
3. qPCR程序設置
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) | 信號采集 |
| 預變性 | 95℃ | 5 min | 1 | 否 |
| 變性 | 95℃ | 10 sec | 40 | 否 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | 40 | 是 |
| 熔解曲線 | 60-95℃ | 梯度升溫 | 1 | 是 |
結果判讀
陽性：Ct值≤35，且熔解曲線為單一峰。
陰性：無Ct值或Ct值＞38。
重復驗證：臨界值（35＜Ct≤38）需復測。
注意事項
操作需在無菌環(huán)境下進行，避免交叉污染。
熔解曲線出現(xiàn)多峰提示非特異性擴增，需優(yōu)化條件。
試劑解凍后需徹底混勻，避免氣泡影響熒光信號。
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關鍵字： 產(chǎn)酸克雷伯菌;染料法熒光定量;RT-PCR試劑盒;
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