檢驗原理
技術(shù)基礎(chǔ)：采用SYBR Green染料法實時熒光定量PCR技術(shù)，針對化膿性鏈球菌基因組高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物，通過體外擴增靶標(biāo)核酸并釋放熒光信號，實現(xiàn)定性及定量檢測。
靈敏度與特異性：引物經(jīng)優(yōu)化可避免與其他微生物DNA交叉反應(yīng)，檢測限低至10^2拷貝/μL，線性范圍覆蓋5個數(shù)量級。
對照設(shè)置：含陽性對照（非活體DNA片段）和陰性對照（NTC），用于結(jié)果判讀及污染監(jiān)控。
產(chǎn)品名稱 | 化膿性鏈球菌（釀膿鏈球菌）染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus pyogenes Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4388 |
主要組分
預(yù)混液（含DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及SYBR Green染料）
化膿性鏈球菌特異性引物對
陽性對照（10^8拷貝/μL）
熒光PCR專用模板稀釋液
RNase-free超純水
操作流程
1. 樣本處理
臨床樣本（如咽拭子、膿液）：需提取DNA后使用。
對照稀釋：按10倍梯度稀釋陽性對照（10^2-10^7拷貝/μL），獨立操作避免污染。
2. 反應(yīng)體系配置（20 μL/孔）
| 組分 | 體積（μL） |
| 預(yù)混液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| 超純水 | 6 |
3. PCR程序（以ABI 7500為例）
預(yù)變性：95℃ 3分鐘
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光）
熔解曲線分析：60℃至95℃，升溫速率0.3℃/秒
4. 結(jié)果分析
定性：Ct值≤35且熔解曲線峰單一判為陽性。
定量：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算模板濃度。
注意事項
避免反復(fù)凍融試劑，解凍后需離心混勻并置于冰上。
實驗分區(qū)操作（樣本處理、PCR配置、擴增區(qū)），防止氣溶膠污染。
建議設(shè)置3次技術(shù)重復(fù)及陰性對照。
儲存與有效期
-20℃避光保存，有效期12個月。
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關(guān)鍵字： 化膿性鏈球菌（釀膿鏈球菌）;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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