檢驗(yàn)原理
本試劑盒采用SYBR Green染料法實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，針對(duì)海豚鏈球菌（Streptococcus iniae）基因組高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，通過(guò)熒光信號(hào)檢測(cè)實(shí)現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)核酸的定性及定量分析。在反應(yīng)體系中，若存在海豚鏈球菌核酸模板，PCR擴(kuò)增將釋放熒光信號(hào)，儀器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)信號(hào)強(qiáng)度并輸出結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | 海豚鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus iniae Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR4393 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
高靈敏度：優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，檢測(cè)限低至10拷貝/μL。
高特異性：引物經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證，不與相近菌種（如無(wú)乳鏈球菌、A組鏈球菌等）發(fā)生交叉反應(yīng)。
即開(kāi)即用：預(yù)混反應(yīng)體系（含酶、dNTPs、緩沖液等），用戶僅需提供DNA模板。
雙重質(zhì)控：提供陽(yáng)性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)品DNA片段）和陰性對(duì)照（無(wú)模板對(duì)照，NTC），確保結(jié)果可靠性。
寬動(dòng)態(tài)范圍：定量檢測(cè)線性范圍覆蓋10^2–10^7拷貝/μL。
操作流程
樣本準(zhǔn)備
樣本類型：
魚(yú)類組織（肌肉、肝臟等）：無(wú)菌采集后勻漿，提取DNA。
水體樣本：過(guò)濾濃縮后提取核酸。
DNA提取：推薦使用柱式法或磁珠法核酸提取試劑盒，確保純度（A260/A280比值1.8–2.0）。
試劑配制
解凍與混勻：
從-20℃取出預(yù)混液，冰上解凍后輕柔顛倒混勻，避免氣泡。
短暫離心（1000 rpm，10秒）收集管壁液體。
反應(yīng)體系配置（20 μL/反應(yīng)）：
預(yù)混液：10 μL
引物混合液：2 μL
DNA模板：2 μL（建議濃度5–100 ng/μL）
RNase-free水：補(bǔ)至20 μL
PCR程序設(shè)置
預(yù)變性：95℃ 5分鐘
循環(huán)階段（40 cycles）：
變性：95℃ 15秒
退火/延伸：60℃ 30秒（熒光采集）
熔解曲線分析：60–95℃，每0.5℃遞增，持續(xù)5秒/step。
數(shù)據(jù)分析
定性檢測(cè)：Ct值≤35且熔解曲線為單一峰判為陽(yáng)性。
定量檢測(cè)：以標(biāo)準(zhǔn)品（10^2–10^7拷貝/μL）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本拷貝數(shù)。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作，避免氣溶膠污染。
陽(yáng)性對(duì)照與樣本需在不同區(qū)域處理，防止交叉污染。
熔解曲線異常（多峰）可能提示引物二聚體或非特異性擴(kuò)增，需優(yōu)化條件。
儲(chǔ)存與有效期
-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。
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關(guān)鍵字： 海豚鏈球菌;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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