本試劑盒基于PCR特異性擴(kuò)增原理，針對(duì)犬布魯氏桿菌專屬基因序列設(shè)計(jì)引物探針，可精準(zhǔn)檢測(cè)犬血液、精液、陰道分泌物、胎盤組織樣本中的病原菌核酸。犬布魯氏桿菌主要引發(fā)犬繁殖障礙、流產(chǎn)、不育，且存在人畜共患風(fēng)險(xiǎn)，試劑盒特異性強(qiáng)，無交叉反應(yīng)，檢測(cè)周期短。適用于寵物犬、養(yǎng)殖犬的布魯氏桿菌感染篩查、臨床病例確診、繁育種群凈化及公共衛(wèi)生防疫檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 犬布魯氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P013955 |
英文名稱 | Brucella canisPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
qPCR 靶向犬布魯氏菌特異性 VirB 毒力基因，探針熒光信號(hào)專一識(shí)別犬源布魯氏菌，無其他種交叉擴(kuò)增。
普通 PCR 擴(kuò)增犬布魯氏菌特有 16S rRNA 突變序列，電泳區(qū)分牛羊布魯氏菌。
一步裂解直擴(kuò) PCR，犬生殖道拭子直接上機(jī)，快速篩查犬流產(chǎn)病原布魯氏菌。
?操作步驟?：
DNA提取（樣本制備區(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號(hào)，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽性對(duì)照：
7號(hào)管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對(duì)照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號(hào)管，最終濃度跨5個(gè)數(shù)量級(jí)（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測(cè)DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對(duì)照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析（可選）。
?注意事項(xiàng)?：
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽性模板僅在生物安全柜開蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實(shí)驗(yàn)后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復(fù)凍融，單次融化冰上放置不超過 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測(cè)，嚴(yán)禁人臨床體外診斷；
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實(shí)驗(yàn)室；
若陰性對(duì)照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、移液器紫外過夜消毒。
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關(guān)鍵字： 犬布魯氏桿菌;PCR檢測(cè)試劑盒;
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