本試劑盒采用RT-PCR檢測技術(shù)，針對山羊關(guān)節(jié)炎腦脊髓炎病毒核酸進(jìn)行特異性檢測，適配山羊血液、關(guān)節(jié)液、腦組織等樣本。該病毒可導(dǎo)致山羊關(guān)節(jié)腫脹、行走障礙、神經(jīng)損傷，且潛伏期長、垂直傳播風(fēng)險高，傳統(tǒng)血清學(xué)檢測難以識別早期感染。本試劑盒靈敏度高，可精準(zhǔn)捕捉潛伏期、低載量病毒樣本，檢測結(jié)果精準(zhǔn)可靠，能夠?qū)崿F(xiàn)疫病的早期診斷與帶毒羊篩查，適用于山羊養(yǎng)殖基地疫病凈化、種羊檢疫、疫病流行病學(xué)調(diào)研，助力規(guī)?；窖蝠B(yǎng)殖的疫病防控與種群健康優(yōu)化。
產(chǎn)品名稱 | 山羊關(guān)節(jié)炎腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P013992 |
英文名稱 | Caprine Arthritisencephalitis Virus(CAEV)PCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
病毒 RNA 經(jīng)反轉(zhuǎn)錄生成 cDNA，以病毒 gag 基因特異性引物開展 RT-PCR，電泳擴(kuò)增條帶判定山羊體內(nèi)病毒感染情況。
qRT-PCR 熒光探針靶向病毒包膜蛋白基因，擴(kuò)增實(shí)時熒光信號，可定量山羊外周血、關(guān)節(jié)液中病毒核酸拷貝數(shù)。
套式反轉(zhuǎn)錄 PCR 雙重擴(kuò)增，提升山羊低病毒血癥樣本檢出率，排除山羊細(xì)胞內(nèi)源核酸非特異性結(jié)合干擾。
?操作步驟?：
DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽性對照：
7號管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號管，最終濃度跨5個數(shù)量級（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析（可選）。
?注意事項(xiàng)?：
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽性模板僅在生物安全柜開蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實(shí)驗(yàn)后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復(fù)凍融，單次融化冰上放置不超過 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測，嚴(yán)禁人臨床體外診斷；
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實(shí)驗(yàn)室；
若陰性對照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實(shí)驗(yàn)室臺面、移液器紫外過夜消毒。
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關(guān)鍵字： 山羊關(guān)節(jié)炎腦脊髓炎病毒;PCR檢測試劑盒;
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