本試劑盒為馬梭菌專屬核酸檢測試劑，采用PCR擴(kuò)增技術(shù)，靶向檢測馬梭菌特異性基因片段，適配馬屬動物糞便、腸道組織、養(yǎng)殖環(huán)境樣本。馬梭菌是馬屬動物腸道主要致病梭菌，感染后易引發(fā)腹瀉、腸炎、腸道壞死等病癥，嚴(yán)重影響馬匹養(yǎng)殖與競技繁育。本試劑盒特異性強(qiáng)、檢測精準(zhǔn)，可快速完成馬匹感染篩查與病因確診，有效規(guī)避其他腸道梭菌干擾，適用于馬場日常疫病監(jiān)測、患病馬匹診療、養(yǎng)殖環(huán)境菌群安全檢測等場景。
產(chǎn)品名稱 | 馬梭菌PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014029 |
英文名稱 | Clostridium equiPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
馬腸道糞便細(xì)菌 DNA 提取，馬梭菌 16S rRNA 特異性引物 PCR，電泳條帶鑒定菌種。
SYBR Green 熒光定量 PCR，熔解曲線區(qū)分馬梭菌與產(chǎn)氣莢膜梭菌等近緣梭菌。
糞便粗提快速 PCR，無需細(xì)菌純培養(yǎng)，糞便上清粗核酸直接擴(kuò)增靶基因，適配馬場大規(guī)模篩查。
?操作步驟?：
DNA提取（樣本制備區(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽性對照：
7號管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號管，最終濃度跨5個(gè)數(shù)量級（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析（可選）。
?注意事項(xiàng)?：
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽性模板僅在生物安全柜開蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實(shí)驗(yàn)后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復(fù)凍融，單次融化冰上放置不超過 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測，嚴(yán)禁人臨床體外診斷；
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實(shí)驗(yàn)室；
若陰性對照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實(shí)驗(yàn)室臺面、移液器紫外過夜消毒。
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