本試劑盒依托梭狀芽孢桿菌屬高度保守基因序列,研發(fā)廣譜通用PCR檢測(cè)體系,可一次性篩查肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、破傷風(fēng)梭菌等各類致病梭狀芽孢桿菌。梭狀芽孢桿菌屬菌種繁多、致病性各異,單一檢測(cè)效率極低。本試劑盒覆蓋屬內(nèi)主要致病菌種,檢測(cè)高效、體系穩(wěn)定、特異性高,可快速完成環(huán)境、食品、畜禽樣本的廣譜篩查,適用于養(yǎng)殖安全質(zhì)控、食品安全檢測(cè)、公共衛(wèi)生疫病監(jiān)測(cè)等多場景。
產(chǎn)品名稱 | 梭狀芽孢桿菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014038 |
英文名稱 | Clostridium spp.PCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理:

靶向梭狀芽孢桿菌屬共有核糖體保守序列通用引物,食品、畜禽樣本 DNA 廣譜篩查全部梭菌。
通用 SYBR 熒光定量 PCR,熔解曲線可區(qū)分梭菌屬不同菌種,完成初篩分型。
芽孢廣譜巢式 PCR,兩輪通用引物擴(kuò)增,高效檢出樣本內(nèi)微量梭菌芽孢基因組核酸。
?操作步驟?:

DNA提取(樣本制備區(qū))
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA,確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備(樣本制備區(qū))
標(biāo)記6支離心管為7至2號(hào),每管加入45 μL DEPC-H2O(需使用帶濾芯槍頭)。
梯度稀釋陽性對(duì)照:
7號(hào)管:加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對(duì)照,震蕩混勻,得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品;
依次稀釋至2號(hào)管,最終濃度跨5個(gè)數(shù)量級(jí)(1×10^7至1×10^3拷貝/μL)。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用,避免反復(fù)凍融。
試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻,短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL,含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣(樣本處理區(qū))
分別加入5 μL待測(cè)DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管,陰性對(duì)照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋,避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀:
預(yù)變性:95℃ 2分鐘;
循環(huán)階段(40次):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號(hào));
熔解曲線分析(可選)。
?注意事項(xiàng)?:

試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板,操作全程佩戴手套、口罩,陽性模板僅在生物安全柜開蓋;
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實(shí)驗(yàn)后 121℃高壓滅菌再丟棄;
試劑避免反復(fù)凍融,單次融化冰上放置不超過 2 h,使用完畢立即放回 - 20℃;
移液器吸頭一次性使用,禁止重復(fù)吸取,防止交叉污染;
試劑盒僅用于科研檢測(cè),嚴(yán)禁人臨床體外診斷;
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū),防止氣溶膠大面積污染實(shí)驗(yàn)室;
若陰性對(duì)照持續(xù)出現(xiàn)雜帶,全部更換全新試劑盒,實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、移液器紫外過夜消毒。
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