本試劑盒基于產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌保守基因研發(fā)通用型檢測體系，可廣譜檢測各亞型產(chǎn)氣莢膜梭菌核酸。該菌種是畜禽腸道疫病、食物中毒的核心致病菌，可引發(fā)腸炎、腸毒血癥、食物中毒等多種病癥，亞型繁多、檢測復雜。本試劑盒實現(xiàn)多亞型全覆蓋篩查，通用性強、檢測效率高，特異性優(yōu)異，無交叉誤檢，適用于畜禽養(yǎng)殖疫病監(jiān)測、食品微生物安全檢測、公共衛(wèi)生食物中毒溯源等場景。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌通用PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014035 |
英文名稱 | Clostridium perfringensPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
靶向產(chǎn)氣莢膜梭菌屬共有毒素保守基因通用引物，畜禽食品樣本 DNA PCR 廣譜篩查該菌。
通用熒光探針 qPCR，探針識別屬保守毒力基因，半定量樣本內(nèi)產(chǎn)氣莢膜梭菌總載量。
廣譜巢式 PCR，兩輪通用引物擴增，解決食品低濃度梭菌芽孢核酸漏檢問題。
?操作步驟?：
（一）反應(yīng)體系配制（冰上操作，防酶失活與污染）
按 “水→緩沖液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 順序加樣（酶最后加，避免失活）。
輕輕渦旋混勻，短暫離心（3000rpm，10s），使液體沉至管底。
無熱蓋的 PCR 儀：加 1 滴礦物油覆蓋液面，防止蒸發(fā)。
（二）PCR 程序設(shè)置（標準 35 循環(huán)）
預變性：94℃，3-5min（徹底變性模板 DNA）。
循環(huán)階段（35 次）：
變性：94℃，30s（雙鏈解鏈）。
退火：55-65℃，30s（引物結(jié)合模板，按引物 Tm 值調(diào)整）。
延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新鏈，1kb 片段約 1min）。
終延伸：72℃，5-10min（確保片段完整延伸）。
保溫：4℃，∞（防止非特異性復性，短期保存）。
（三）產(chǎn)物檢測（瓊脂糖凝膠電泳）
制膠：1% 瓊脂糖凝膠（1g 瓊脂糖 + 100mL 1×TAE 緩沖液），加熱融化后加核酸染料，倒膠插梳，凝固 30min。
上樣：取 5μL PCR 產(chǎn)物 + 1μL 上樣緩沖液，點樣；同時加 DNA Marker（分子量對照）。
電泳：120V，20-30min，至溴酚藍遷移至凝膠 2/3 處。
成像：凝膠成像系統(tǒng)觀察條帶，目標片段位置與預期一致則為陽性。
四、參數(shù)優(yōu)化
退火溫度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火溫度一般低于 Tm 值 5℃，溫度過高無條帶，過低非特異性條帶多。
Mg2?濃度：1.5-2.5mM，濃度過低酶活性低、產(chǎn)量少；過高非特異性擴增增加。
循環(huán)數(shù)：25-35 個循環(huán)，少于 25 個產(chǎn)物不足，多于 35 個易出現(xiàn)非特異性條帶。
延伸時間：按目標片段長度調(diào)整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。
?注意事項?：
分區(qū)操作：試劑配制、樣品處理、PCR擴增需在獨立區(qū)域進行，避免交叉污染
無菌操作：使用帶濾芯槍頭、一次性手套和專用工作服
試劑準備：所有試劑使用前需完全融化，震蕩混勻后短暫離心
避光保存：含熒光探針的試劑需避光保存和操作
防止污染：陽性對照操作需最后進行，實驗后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作臺
公司正在出售的產(chǎn)品：
對蝦桿狀病毒（BP）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法） | 雞皮刺螨PCR檢測試劑盒 | 小鼠二胺氧化酶ELISA試劑盒 |
對蝦壞死性肝胰腺炎（NHPB）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法） | 絲狀網(wǎng)尾線蟲PCR檢測試劑盒 | 小鼠甲狀腺素ELISA試劑盒 |
多瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 | 玉米內(nèi)源基因檢測試劑盒（恒溫熒光法） | 小鼠環(huán)磷酸鳥苷ELISA試劑盒 |
鵝細小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 | 革蜱PCR檢測試劑盒 | 小鼠促甲狀腺素釋放激素ELISA試劑盒 |
附紅細胞體（嗜血支原體）屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | 嗜皮菌PCR檢測試劑盒 | 小鼠促卵泡素ELISA試劑盒 |
肺炎克雷伯菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 多里病毒PCR檢測試劑盒 | 小鼠淀粉樣前體蛋白ELISA試劑盒 |
奮森疏螺旋體（奮森包柔螺旋體）探針法熒光定量PCR試劑盒 | 人膚蠅PCR檢測試劑盒 | 產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌通用PCR檢測試劑盒小鼠促甲狀腺激素ELISA試劑盒 |
蜂房小甲蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 | 安氏網(wǎng)尾線蟲PCR檢測試劑盒 | 小鼠高密度脂蛋白ELISA試劑盒 |
非洲分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒 | 小鼠骨特異性堿性磷酸酶BELISA試劑盒 |
關(guān)鍵字： 產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌通用;PCR檢測試劑盒;
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