?產品名稱：大腸桿菌通用PCR檢測試劑盒
英文名稱：Escherichia coliPCR
貨號：YS-P014178
分類：PCR檢測試劑盒
規(guī)格?：50T/盒
檢測原理：
選用大腸桿菌特異性 uidA 基因作為擴增靶點，區(qū)分其他腸桿菌科細菌
水體、食品樣本細菌裂解，純化核酸去除食物油脂、水體雜質
擴增后熒光信號定性，快速判定樣本中是否存在大腸桿菌污染
實驗流程：
DNA提取（樣本制備區(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
標準曲線制備（樣本制備區(qū)）
標記6支離心管為7至2號，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽性對照：
7號管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標準品；
依次稀釋至2號管，最終濃度跨5個數(shù)量級（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標準品置于冰上備用，避免反復凍融。
試劑配制（試劑準備區(qū)）
反應液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應體系20 μL，含預混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測DNA或標準品至反應管，陰性對照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴增（核酸擴增區(qū)）
按以下程序運行定量PCR儀：
預變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析（可選）。
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注意事項：
試劑盒含生物源性質粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽性模板僅在生物安全柜開蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實驗后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復凍融，單次融化冰上放置不超過 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測，嚴禁人臨床體外診斷；
擴增產物區(qū)產物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實驗室；
若陰性對照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實驗室臺面、移液器紫外過夜消毒。
關鍵字： 大腸桿菌通用;PCR檢測試劑盒;
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