該試劑盒專為足馬杜拉分枝菌核酸檢測研發(fā)，依托特異性PCR擴增原理，靶向識別足馬杜拉分枝菌特異性基因片段，可有效檢測動物組織、環(huán)境標(biāo)本中的病原菌核酸。產(chǎn)品檢測靈敏度高、結(jié)果重復(fù)性好，可快速區(qū)分足馬杜拉分枝菌與其他相近致病微生物，解決傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測周期長、準(zhǔn)確率低的問題，適用于動物足部感染病原篩查、疫病確診及養(yǎng)殖環(huán)境風(fēng)險監(jiān)測工作。
產(chǎn)品名稱 | 足馬杜拉分枝菌PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014393 |
英文名稱 | Madurella mycetomatisPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
裂解樣本菌體釋放核酸，引物鎖定足馬杜拉分枝菌特有的毒力基因區(qū)段，完成指數(shù)級核酸擴增反應(yīng)。
采用染料法熒光定量體系，擴增產(chǎn)物雙鏈 DNA 結(jié)合熒光染料產(chǎn)生特征熒光，熒光增長曲線佐證目標(biāo)菌。
通過熔解曲線分析擴增產(chǎn)物 Tm 值，區(qū)分足馬杜拉分枝菌與近緣真菌、分枝桿菌的擴增產(chǎn)物，提升特異性。
?操作步驟?：
1. DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA，建議濃度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（獨立操作區(qū)）
標(biāo)記6管為梯度稀釋點（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽性對照依次稀釋，混勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品（避免污染）。
3. PCR反應(yīng)體系配制（試劑配制區(qū)）
按以下比例配制（示例）：
| 組分 | 體積（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機檢測
程序設(shè)置：預(yù)變性95℃ 3 min；40循環(huán)（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本濃度。
?注意事項?：
1、實驗分區(qū)管理?
實驗全程需嚴(yán)格劃分三個獨立區(qū)域：?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)?，各區(qū)實驗服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?，防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭，每步更換槍頭；
陽性對照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進行，避免污染其他試劑；
加樣后立即蓋緊管蓋，避免氣溶膠擴散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?，避免反復(fù)凍融，確保穩(wěn)定性；
使用前于冰上解凍并輕柔混勻，瞬時離心后使用。
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關(guān)鍵字： 足馬杜拉分枝菌;PCR檢測試劑盒;
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