本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測原理，酶標(biāo)板預(yù)先包被抗大鼠ALCAM特異性捕獲抗體，加入標(biāo)準(zhǔn)品與大鼠待測樣本后，樣本中的ALCAM抗原被固相抗體特異性捕獲，洗板去除非特異性結(jié)合雜質(zhì)，加入HRP標(biāo)記的ALCAM檢測抗體形成夾心免疫復(fù)合物，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后，檢測吸光度數(shù)值，數(shù)值大小與樣本中ALCAM含量呈正相關(guān)，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量檢測。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒
英文名稱：ALCAM ELISA Kit
貨號：Y-E1579
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測濃度≤2.5ng/mL
檢測范圍：5ng/mL - 1500ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：總時(shí)長3.8小時(shí)
保存條件：2-8℃密封避光保存
有效期：未開封6個月，開封后2個月有效
顯色系統(tǒng)：HRP介導(dǎo)TMB底物顯色，適配大分子蛋白檢測
檢測波長：450nm主波長檢測
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：7梯度標(biāo)準(zhǔn)品，四參數(shù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線
特異性：特異性結(jié)合大鼠ALCAM黏附因子，與其他黏附分子無交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤7.5%，板間CV≤9.5%
注意事項(xiàng)：細(xì)胞樣本需充分裂解離心；避免蛋白樣本降解；洗板充分去除非特異性結(jié)合物
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)
辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
ALCAM 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋，試劑盒室溫平衡 33min，標(biāo)記酶標(biāo)板標(biāo)準(zhǔn)、樣本、空白區(qū)域；
標(biāo)準(zhǔn)孔、待測孔分別加入 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品、大鼠淋巴細(xì)胞上清，空白孔補(bǔ)稀釋液；
全部微孔加入 100μL HRP 標(biāo)記抗 ALCAM 抗體，封板膜密封；
37℃恒溫孵育 70min，一步同步孵育免疫結(jié)合；
洗滌緩沖液浸泡 40s，吸干殘留液體，洗滌 6 次；
避光加入顯色底物 A、B 各 50μL，37℃避光顯色 17min；
終止液終止反應(yīng)，450nm 測吸光度，換算 ALCAM 濃度。
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關(guān)鍵字： 大鼠白細(xì)胞活化黏附因子;ALCAM;ELISA試劑盒;
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