本試劑盒采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，預先將純化的大鼠IgE受體抗原包被于酶標板微孔內(nèi)，封閉非特異性結(jié)合位點后，加入待測樣本、標準品，樣本中存在的抗IgE受體抗體可與包被抗原特異性結(jié)合，再加入酶標記二抗與結(jié)合的一抗結(jié)合，經(jīng)底物顯色、終止反應后，通過酶標儀測定各孔吸光度值，吸光度值與樣本中大鼠抗IgE受體抗體含量呈正相關，依據(jù)標準曲線即可計算出樣本中目標抗體的濃度。
基本參數(shù)?：

產(chǎn)品名稱：大鼠抗IgE受體抗體ELISA試劑盒

英文名稱：Rat anti-IgE receptor antibody ELISA Kit
貨號：Y-E1336

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：最低檢測靈敏度≤0.1ng/mL

檢測范圍：0.2ng/mL - 8ng/mL

反應時間：整體孵育反應總時長120分鐘

保存條件：試劑盒未開封2-8℃冷藏保存，嚴禁冷凍；開封后組分密封2-8℃存放

有效期：未開封原裝試劑盒有效期6個月

顯色系統(tǒng)：TMB底物顯色系統(tǒng)，酸性終止液終止顯色

檢測波長：主檢測波長450nm，參比波長630nm

標準曲線繪制：以標準品濃度為橫坐標，對應OD值為縱坐標，繪制四參數(shù)擬合標準曲線

特異性：與大鼠同類同源抗體無交叉反應，與小鼠、兔等異種物種抗體交叉反應率＜5%

重復性：板內(nèi)變異系數(shù)CV≤8%，板間變異系數(shù)CV≤10%

注意事項：實驗全程避免強光直射、高溫環(huán)境；樣本需新鮮無溶血、無脂血；試劑使用前需充分平衡至室溫，避免試劑污染
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。
實驗步驟如下：

取出試劑盒室溫平衡 30min，配制洗滌液、樣本稀釋液與酶結(jié)合工作液。

設定空白孔、陰性對照孔、陽性對照孔、待測樣本孔，每孔加入對應稀釋后樣本與酶標試劑。

封板膜密封酶標板，37℃恒溫孵育 60min。

棄去孔內(nèi)全部液體，洗板機洗板 5 次，每次浸泡 30s，拍干殘留液體。

每孔依次加入顯色液 A 液、顯色液 B 液，輕柔震蕩混勻，避光 37℃顯色 15min。

加入終止液終止顯色反應，輕晃酶標板混勻。

酶標儀 450nm 波長讀取各孔 OD 值，對照標準曲線計算樣本抗體濃度。
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