本試劑盒基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，酶標板微孔固相包被大鼠TIMP-1特異性抗體，用于特異性捕獲樣本中的TIMP-1抗原。加入梯度標準品和待測大鼠樣本孵育后，抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除游離雜質(zhì)，再加入HRP標記的TIMP-1檢測抗體，形成穩(wěn)定免疫復(fù)合物。經(jīng)顯色、終止反應(yīng)后檢測吸光度，OD值與TIMP-1濃度呈正相關(guān)，通過標準曲線可精準測定大鼠樣本中TIMP-1的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測濃度≤0.05ng/mL

檢測范圍：0.1ng/mL - 11ng/mL

反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長120min（樣本孵育60min、二抗孵育30min、顯色30min）

保存條件：2-8℃避光干燥保存，開封試劑密封存放，防止揮發(fā)污染

有效期：原裝未開封12個月

顯色系統(tǒng)：TMB底物顯色，硫酸終止體系

檢測波長：450nm

標準曲線繪制：6點梯度標準品檢測，四參數(shù)擬合標準曲線，用于樣本定量分析

特異性：特異性結(jié)合大鼠TIMP-1，與TIMP家族其他亞型無交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤7%，板間CV≤9%

注意事項：孵育溫度嚴格控制在37℃，溫度偏差會影響抗原抗體結(jié)合效率
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑室溫復(fù)溫 29min，配制洗滌液，溶解 TIMP-1 凍干標準品并做梯度稀釋，取用酶標板條。

標準孔依次加梯度標品 50μL，樣本孔上樣待測樣本 50μL，空白孔加入樣本稀釋液。

每孔添加酶偶聯(lián)工作液 100μL，覆膜封板，37℃孵育 60min。

棄凈孔內(nèi)液體，洗滌液加滿微孔浸泡 30s，洗板 5 次，倒扣拍干板條。

避光加入顯色 A、B 液各 50μL，37℃避光顯色 15min。

加入終止液 50μL，震蕩混勻終止顯色。

酶標儀 450nm 讀值，標準曲線計算 TIMP-1 濃度。