本試劑盒運用雙抗體夾心ELISA檢測原理，以包被于酶標板的特異性抗大鼠TIMP-2抗體為固相載體，捕獲樣本中的TIMP-2抗原。經過孵育結合、洗板凈化、酶標抗體結合等步驟后，加入底物進行顯色反應，酶催化底物顯色的深淺程度與樣本中TIMP-2蛋白含量成正比。通過酶標儀測定吸光度，對照標準曲線，可定量檢測大鼠生物樣本中TIMP-2的表達濃度。
產品參數：

?靈敏度：最低檢測濃度≤0.07ng/mL

檢測范圍：0.14ng/mL - 10ng/mL

反應時間：總反應時長120min（全程恒溫孵育+顯色）

保存條件：2-8℃冷藏，濃縮洗滌液低溫結晶可溫水溶解，不影響使用效果

有效期：12個月（未開封）

顯色系統：穩(wěn)定型TMB顯色系統，顯色均勻持久

檢測波長：450nm

標準曲線繪制：梯度稀釋標準品，測定吸光度，四參數Logistic擬合曲線

特異性：高特異性識別大鼠TIMP-2，無家族同源交叉反應

重復性：板內CV≤8%，板間CV≤10%

注意事項：終止液具有腐蝕性，操作時做好防護，避免接觸皮膚黏膜
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現配現用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。

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實驗操作流程：

試劑盒常溫放置 33min，稀釋濃縮洗滌液，倍比稀釋 TIMP-2 標準品，固定酶標板使用數量。

空白孔加稀釋液，標準孔加梯度標準品 50μL，樣本孔加入待測上清 / 血清樣本 50μL。

每孔加入酶標記抗體 100μL，密封酶標板，37℃孵育 68min。

洗板 5 次，每次浸泡 33s，棄液后徹底拍干微孔。

避光添加顯色底物 A、B 各 50μL，37℃避光顯色 19min。

滴加終止液 50μL 終止反應，輕微混勻。

450nm 測定 OD 值，根據標準曲線得到 TIMP-2 檢測數值。