本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，預先將特異性人神經(jīng)降壓素(NT)抗體包被于微孔板固相載體上，加入待測樣本、標準品后，樣本中的NT抗原與包被抗體特異性結(jié)合，再加入酶標記二抗形成固相抗體-抗原-酶標抗體復合物，充分孵育洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入底物液進行顯色反應，在酶的催化下底物生成有色產(chǎn)物，最后加入終止液終止反應，通過酶標儀測定特定波長下的吸光度值，吸光度值與樣本中NT含量呈正相關，依據(jù)標準品曲線即可精準計算出樣本中人NT的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 人神經(jīng)降壓素(NT)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E204 |
英文名稱 | NT Elisa Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低可檢出 2.8pg/mL
檢測范圍：15pg/mL ~ 960pg/mL
反應時間：樣本孵育 65min，二抗結(jié)合 50min，底物顯色 18min，總時長約 2h13min
保存條件：未拆封試劑盒 2~8℃避光儲存；開封后板條密封防潮 2~8℃可存 15d，濃縮試劑 - 20℃分裝凍存
顯色系統(tǒng)：TMB 單組分顯色液，硫酸終止顯色反應
檢測波長：主波長 450nm，參比波長 630nm
標準曲線繪制：采用五參數(shù) Logistic 擬合，設置 7 個梯度標準品濃度點，扣除空白孔 OD 值后擬合曲線
注意事項：NT 易被蛋白酶降解，血清樣本采集后 30min 內(nèi)分離分裝凍存；避免反復凍融樣本超過 2 次
儲存與有效期：
未開封整套試劑盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷凍；有效期 12 個月。
開封后保存
剩余酶標板條：自封袋密封，內(nèi)置干燥劑 2～8℃避光；1 個月內(nèi)用完。
HRP 酶結(jié)合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。
濃縮洗滌液：2～30℃常溫保存，結(jié)晶溫水溶解不影響效果。
復溶后標準品：分裝 - 20℃凍存，避免反復凍融，1 個月內(nèi)使用。
過期試劑禁止使用。
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實驗操作流程：
樣本與試劑盒室溫平衡 30min，配制洗滌液、酶結(jié)合工作液、NT 標準品梯度稀釋液，取出所需板條，剩余板條密封冷藏保存。
設空白孔、標準品孔、待測樣本孔，標準品孔每孔加入 50μL 梯度稀釋 NT 標準液，待測孔加 40μL 樣本稀釋液 + 10μL 待測樣本，空白孔不加液體。
除空白孔外所有孔加入 100μL 酶標記 NT 抗體工作液，封板膜封板，37℃恒溫孵育 60min。
撕去封板膜，棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液靜置 30s 后甩干，重復洗板 5 次，拍干微孔板殘留液體。
每孔依次加入顯色劑 A 液 50μL、顯色劑 B 液 50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15min。
每孔快速加入 50μL 終止液終止酶促顯色反應，溶液由藍變黃。
酶標儀 450nm 波長測定各孔 OD 值，根據(jù)標準品濃度與對應 OD 值繪制標準曲線，計算樣本中 NT 含量。
關鍵字： 人神經(jīng)降壓素;NT;ELISA試劑盒;
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