背景及概述^[1]

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂是平板計數(shù)法中的選擇性計數(shù)培養(yǎng)基，使用量巨大?，F(xiàn)行的國標規(guī)定ＶＲＢＡ的配制需煮沸2min3次，耗時費力且操作容易有燙傷和培養(yǎng)基噴射的危險。如何配制高效ＶＲＢＡ、減少實驗中的操作風(fēng)險，已成為食品微生物實驗室檢測大腸菌群面臨的一個急需解決的問題。

制備^[1]

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂用于大腸菌群的固體平板檢測。

1）用于檢測原料膠中大腸菌群含量。方法包括：(1)將原料膠置于含有生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，進行均質(zhì)處理，得到均質(zhì)處理產(chǎn)物；(2)將均質(zhì)處理產(chǎn)物置于無菌均質(zhì)袋中，再向無菌均質(zhì)袋中加入結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基，并進行第二均質(zhì)處理，得到第二均質(zhì)處理產(chǎn)物；(3)將含有第二均質(zhì)處理產(chǎn)物的均質(zhì)袋進行平整化處理；(4)將經(jīng)過平整化處理的含有第二均質(zhì)處理產(chǎn)物的均質(zhì)袋進行靜置培養(yǎng)，得到可疑大腸菌群菌落；以及(5)將可疑大腸菌群菌落接種于含有煌綠乳糖膽鹽肉湯培養(yǎng)基的試管中進行培養(yǎng)，以便確定大腸菌群菌落數(shù)，進而確定對原料膠中大腸菌群含量。本發(fā)明的方法能夠有效提高檢出率，準確性強。

2）制備一種大腸菌群選擇性顯色培養(yǎng)基，其中每1000mL培養(yǎng)基含有如下重量的組分：結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂15-25g、特異性酶顯色底物5-25g、二甲基甲酰胺0.05-20g、酵母粉1-5g、乳糖1-8g、氯化鈉5-10g、磷酸氫二鉀3-5g、磷酸二氫鉀0.5-2g、月桂基硫酸鈉0.1-0.3g。本發(fā)明還提供了一種含有所述大腸菌群選擇性顯色培養(yǎng)基的檢測試紙。本發(fā)明采用兩種特異性酶顯色底物進行復(fù)配使用，其對于大腸菌群的特異性和敏感度較單獨使用任何一種顯色底物顯著增強，且檢出率高、檢出時間短。

主要參考資料

[1] 結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂配制中煮沸與高壓滅菌效果比較

[2] CN201511001131.2檢測原料膠中大腸菌群含量的方法

[3] CN201410682129.5大腸菌群選擇性顯色培養(yǎng)基及其檢測試紙