概述[1]
蜀黍苷的化學(xué)名P-羥基-(S)-苯乙醇硝酰-β-D-糖苷，為存在于高梁(Sorghum)中的氰糖苷，可通過酪氨酸生成，貯藏于葉表皮細胞中。分解時可產(chǎn)生氰化氫和P-羥基苯醛。催化此反應(yīng)的有兩種酶，即β-糖苷酶可對(1)水解，羥基苯乙醇硝酰裂解酶可催化(2)分解，主要都含于葉肉細胞中。在葉組織被破壞時，產(chǎn)生氰化氫的機制在于因破壞而由分解酶催化的分解。
檢測方法[1]
方法1：澳洲堅果各部位蜀黍苷含量的測定。以苦杏仁苷為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，采用高效液相色譜法，DiamonsilC18(150mm×4.6mm，5μm)色譜柱，柱溫35℃，自動進樣器進樣量5μL，總流速1.0mL/min，乙腈(A)－0.1%甲酸水溶液(B)為流動相，使用蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)進行檢測。結(jié)果表明:蜀黍苷和苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品的濃度比(X)與對應(yīng)的峰面積比(Y)所作標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.465389X2+0.349685X－0.000520968，決定系數(shù)Ｒ2=0.9977，ＲSD為2.60%。方法的平均回收率為97.93%±2.35%，ＲSD為2.39%。對澳洲堅果各部位蜀黍苷含量進行測定發(fā)現(xiàn)，澳洲堅果花中蜀黍苷含量最高，達(49.92±0.96)mg/g，葉次之，果仁中蜀黍苷含量最低，僅為(0.64±0.01)mg/g。且不同品種青皮中蜀黍苷含量亦不同。HPLC－ELSD內(nèi)標(biāo)法測定蜀黍苷快速簡便，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，成本較低，測定結(jié)果可靠。澳洲堅果花、葉中蜀黍苷含量較高，使用時應(yīng)適當(dāng)考慮脫除其中的蜀黍苷。澳洲堅果仁中僅含微量蜀黍苷，在安全使用范圍之內(nèi)。
方法2：一種快速檢測白酒釀酒原料高粱中蜀黍苷的方法，其步驟為：
（1）通過XevoTQ串聯(lián)四極桿液相質(zhì)譜儀（WatersXevoTQMS，沃特世科技上海有限公司）檢測蜀黍苷標(biāo)準(zhǔn)品來確定其特征離子并建立LC–MS/MS–MRM：
a、用甲醇配制200mg/L的蜀黍苷標(biāo)準(zhǔn)品儲備液作為最高濃度，用甲醇將其稀釋至20mg/L作為蜀黍苷標(biāo)準(zhǔn)使用液；取1mL蜀黍苷標(biāo)準(zhǔn)使用液用微孔濾膜過濾處理后放入2mL樣品瓶待進樣檢測；
b、使用XevoTQ串聯(lián)四極桿液相質(zhì)譜儀來檢測蜀黍苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，液相條件：流動相A：0.1%甲酸-水；流動相B：乙腈；流速0.3mL/min；洗脫梯度：流動相B4min由5%線性增加至40%，再1min由40%線性增加至100%，持續(xù)1min，再1min由100%線性減少至5%；色譜柱：WatersAcquityC18column，50mm×2.1mm×1.7μm；進樣量2μL；ESI離子源；正離子模式；毛細管電壓2.7kV，錐孔電壓20V，碰撞能量12V；源溫度120℃，去溶劑溫度300℃；去溶劑氣體流速700L/h，錐孔氣體流速50L/h，碰撞氣體流速0.15mL/min；
c、根據(jù)檢測結(jié)果，蜀黍苷母離子為m/z329，特征子離子為m/z180及m/z132，建立LC–MS/MS–MRM方法，選擇m/z329-180及m/z329-132作為定性離子對，m/z329-132作為定量離子對；
（2）LC–MS/MS–MRM方法對白酒釀酒原料高粱中的蜀黍苷定性檢測：取5g磨碎之后的高粱放置于燒杯中，加入20mL甲醇，超聲波萃取30min后過夜保存，次日取萃取液置于50mL離心管12000rpm離心30min取上清過濾，加入體積比1:1的超純水，使用旋蒸儀蒸發(fā)去除20mL甲醇后取1mL待進樣檢測；
（3）制作蜀黍苷定量標(biāo)準(zhǔn)曲線對白酒釀酒原料高粱中的蜀黍苷進行準(zhǔn)確定量：
d、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：將20mg/L蜀黍苷標(biāo)準(zhǔn)使用液梯度稀釋成一系列蜀黍苷標(biāo)準(zhǔn)使用液，以峰面積為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
e、白酒釀酒原料高粱預(yù)處理：取5g磨碎后的高粱于燒杯中，加入20mL甲醇，超聲波萃取30min后過夜，次日將萃取液置于50mL離心管12000rpm離心30min，取上清過濾后加入體積比1:1的超純水，使用旋蒸儀蒸發(fā)去除20mL甲醇后取1mL待進樣；
f、白酒釀酒原料高粱中蜀黍苷的定量分析：使用LC–MS/MS–MRM方法檢測樣品，使用標(biāo)準(zhǔn)曲線進行定量。
主要參考資料
[1] 澳洲堅果各部位蜀黍苷含量的測定
[2] CN201510308706.9一種快速檢測白酒釀酒原料高粱中蜀黍苷的方法