簡介^[1]

大鼠正常肝細(xì)胞種屬為大鼠，來源于肝臟組織，屬于上皮細(xì)胞樣的貼壁生長細(xì)胞。培養(yǎng)用培養(yǎng)基為DMEM(PM150210) + 10% FBS(164210-500) + 1% P/S(PB180120)，推薦的傳代比例為1:2-1:4，推薦換液頻率為2~3次每周。

細(xì)胞操作^[1]

收到大鼠正常肝細(xì)胞以后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；然后將小管大鼠正常肝細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25 培養(yǎng)瓶或6cm 培養(yǎng)皿（不需要離心），加入5ml 左右含F(xiàn)BS 的培養(yǎng)基均勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看大鼠正常肝細(xì)胞匯合度：若未超過80%匯合度，換液繼續(xù)培養(yǎng)，根據(jù)情況傳代或者凍存。若超過80%匯合度，可直接進(jìn)行傳代（細(xì)胞貼壁處理方法）。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后將培養(yǎng)瓶翻過來讓胰酶與細(xì)胞面接觸大約10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的次傳代一般是一傳三。

主要參考文獻(xiàn)

[1] 姚娟娟，周曉蓉，牛廷勇；單壁碳納米管對大鼠肝細(xì)胞株大鼠正常肝細(xì)胞的毒性作用?！抖纠韺W(xué)雜志》。