背景[1-3]
小鼠抗EGFR單克隆抗體是一類可以特異性結合EGFR的單克隆抗體，主要用于檢測EGFR的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學實驗。
檢測原理：雙抗體夾心法測定標本中EGFR水平。用純化的Anti-ACTA2抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入EGFR，再與HRP標記的EGFR抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的EGFR呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中EGFR濃度。
EGFR是表皮生長因子受體（HER）家族成員之一。該家族包括HER1（erbB1，EGFR）、HER2（erbB2，NEU）、HER3（erbB3）及HER4（erbB4）。HER家族在細胞生理過程中發(fā)揮重要的調節(jié)作用。
EGFR（Epidermal Growth Factor Receptor）是上皮生長因子（EGF）細胞增殖和信號傳導的受體。EGFR屬于ErbB受體家族的一種，該家族包括EGFR (ErbB-1),HER2/c-neu(ErbB-2),Her 3(ErbB-3) 和Her 4(ErbB-4)。EGFR也被稱作HER1、ErbB1，突變或過表達一般會引發(fā)腫瘤。EGFR是一種糖蛋白，屬于酪氨酸激酶型受體，細胞膜貫通，分子量170KDa。EGFR位于細胞膜表面，靠與配體結合來激活，包括EGF和TGFα（transforming growth factor α）。激活后，EGFR由單體轉化為二聚體，盡管也有證據(jù)表明，激活前也存在二聚體。
應用[4][5]
用于紅景天苷對大氣細顆粒物致小鼠皮膚衰老的干預作用及初步機制探究
研究發(fā)現(xiàn)PM2.5可促進EGFR表達，紅景天苷(Salidroside)是中藥紅景天的主要有效成分。紅景天苷抗氧化性強,被稱為“天然抗氧化劑”,可清除活性氧。
(1) 探究經(jīng)氣管滴注PM2.5是否影響EGFR表達及誘導小鼠皮膚衰老,同時驗證課題組以往研究結果可靠性;(2)探究紅景天苷是否干預上述過程;
(2) 完善PM2.5皮膚毒理學;(4)對長期暴露于PM2.5的特殊人群進行科學指導;(5)為開發(fā)紅景天苷抗皮膚衰老產品提供理論依據(jù)。
方法(1)采集某建筑工地處PM2.5并制成干粉;(2)將40只BALB/c雌性小鼠隨機均分為生理鹽水組及低/中/高劑量PM2.5(1.0、4.8 和 24.0mg/kg)組。經(jīng)氣管滴注液體(1.5ml/kg),1 次/日,連續(xù)5日;
(3) 將40只BALB/c雌性小鼠隨機均分為高劑量PM2.5+生理鹽水組及高劑量PM2.5+低/中/高劑量紅景天苷(10.0、20.0和80.0mg/kg)組。經(jīng)氣管滴注PM2.5后予液體灌胃(10.0ml/kg),1次/日,連續(xù)5日;
(4) 觀察小鼠毛發(fā)及皮膚彈性變化;(5)實驗結束后24h處死小鼠并采集皮膚組織,實時熒光定量PCR法測定皮膚組織中EGFR mRNA表達量;(6)SPSS及RStudio進行統(tǒng)計學分析。
結論(1)經(jīng)氣管滴注PM2.5后,PM2.5可通過促進EGFR表達誘導皮膚衰老,本課題研究結果與課題組以往結果一致,證實研究結論可靠;(2)紅景天苷可通過抑制EGFR表達干預PM2.5誘導的皮膚衰老過程,開發(fā)紅景天苷抗皮膚衰老產品將具有重要的臨床應用價值。
參考文獻
[1]PM2.5 Exposure Elicits Oxidative Stress Responses and Mitochondrial Apoptosis Pathway Activation in HaCaT Keratinocytes[J] . Rong Hu,Xiao-Yuan Xie,Si-Ka Xu,Ya-Ning Wang,Ming Jiang,Li-Rong Wen,Wei Lai,Lei Guan. Chinese Medical Journal . 2017 (18)
[2]Analysis of PM2.5-induced cytotoxicity in human HaCaT cells based on a microfluidic system[J] . Yuxiao Zhang,Lulu Zheng,Jiang Tuo,Qi Liu,Xinlian Zhang,Zhixuan Xu,Sixiu Liu,Guodong Sui. Toxicology in Vitro . 2017
[3]Involvement of EGF receptor signaling and NLRP12 inflammasome in fine particulate matter‐induced lung inflammation in mice[J] . Yuefei Jin,Weidong Wu,Weiguo Zhang,Yang Zhao,Yongjun Wu,Guoyin Ge,Yue Ba,Qiang Guo,Tianyu Gao,Xuejing Chi,Huiyun Hao,Jing Wang,Feifei Feng. Environmental Toxicology . 2017 (4)
[4]Recognizing the impact of ambient air pollution on skin health[J] . S. E. Mancebo,S. Q. Wang. J Eur Acad Dermatol Venereol . 2015 (12)
[5]李慧. 紅景天苷對大氣細顆粒物致小鼠皮膚衰老的干預作用及初步機制探究[D].南方醫(yī)科大學,2018.