背景[1-3]
人雪旺細(xì)胞提取于人脊神經(jīng)組織，原代凍存。此細(xì)胞通過(guò)對(duì)S-100,GFAP和CD90免疫熒光染色驗(yàn)證，經(jīng)測(cè)試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
人雪旺細(xì)胞
雪旺細(xì)胞是神經(jīng)嵴的衍生物，形成了周圍神經(jīng)髓磷脂軸突的髓鞘。它環(huán)繞在末梢神經(jīng)軸突的軸上，沿著軸突節(jié)形成一層髓磷脂髓鞘。雪旺細(xì)胞對(duì)末梢神經(jīng)的發(fā)育、功能和再生起著重要作用。當(dāng)軸突快死亡時(shí)，雪旺細(xì)胞環(huán)繞其周圍幫助消化軸突。連續(xù)的雪旺細(xì)胞形成一個(gè)空的管道，在其尾端形成新的軸突。
末梢神經(jīng)中的雪旺細(xì)胞的數(shù)量是受到嚴(yán)格調(diào)控的。體外增殖受到諸如PDGF,FGF，神經(jīng)元和其它多肽類生長(zhǎng)因子的刺激。雪旺細(xì)胞為研究一系列發(fā)育問(wèn)題提供了相對(duì)簡(jiǎn)單、明確、易懂的哺乳動(dòng)物模型。在研究神經(jīng)病和神經(jīng)再生，以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)修復(fù)方面，雪旺細(xì)胞也具有特殊的臨床重要性。
培養(yǎng)步驟：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
應(yīng)用[4][5]
用于人雪旺細(xì)胞促進(jìn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)方向分化的研究
觀察人雪旺細(xì)胞（human Schwann cells,hSCs）對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord-mesenchymal stem cells,hUC-MSCs）在脊髓損傷（spinal cord injury,SCI）大鼠體內(nèi)存活、分化的影響
方法：無(wú)菌條件下取出健康、因外傷行截肢治療患者的坐骨神經(jīng),應(yīng)用雙酶消化組織塊結(jié)合機(jī)械分離法分離培養(yǎng)hSCs、采用低濃度胰蛋白酶消化和差速貼壁法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行純化,傳至第4代（P4）的hSCs用S-100抗體對(duì)其進(jìn)行鑒定,本實(shí)驗(yàn)植入的hSCs為P5；實(shí)驗(yàn)所用的hUC-MSCs由天津協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司提供,細(xì)胞經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞儀鑒定符合干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn),植入的hUC-MSCs亦為P5。取8周齡雌性Wistar大鼠80只,以Impactor Model-Ⅱ型打擊器制作脊髓胸10（T10）損傷模型
。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)均分為4組：DMEM對(duì)照組（A）,hSCs移植組（B）,hUC-MSCs移植組（C）,hUC-MSCs與hSCs聯(lián)合移植組（D）。移植后2w,4w,各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)取出2只經(jīng)心臟灌注后取材固定（脊髓長(zhǎng)度包括損傷中心頭尾端長(zhǎng)約1.5cm）,制成石蠟切片后行GFAP,MBP與NF-H免疫熒光染色,植入的細(xì)胞行MAB1281免疫熒光染色進(jìn)行體內(nèi)示蹤。
各組分別于移植后1W,2w,3w,4w以同樣方法取材,分別行Western-Blot,Real-Time PCR檢測(cè)。上述數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
參考文獻(xiàn)
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[5]陳有.人雪旺細(xì)胞促進(jìn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)方向分化的研究[D].天津醫(yī)科大學(xué),2012.