背景[1-3]
NCI-H358人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞是于1981年從一位開(kāi)始化療之前的患者的腫瘤組織中分離得到的。超微結(jié)構(gòu)研究表明，NCI-H358細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中有Clara細(xì)胞的特征結(jié)構(gòu)，NCI-H358細(xì)胞表達(dá)主要的肺表面結(jié)合蛋白SP-A和RNA，不表達(dá)SP-B和SP-C；NCI-H358細(xì)胞在軟瓊脂中的克隆形成效率為0.83%。
NCI-H358人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
應(yīng)用[4][5]
用于99mTc-RGD-4CK、99mTc-N（NOET）2、99mTc-MIBI與18F-FDG在荷NCI-H358肺癌裸鼠模型中的對(duì)比研究
建立NCI-H358人細(xì)支氣管肺泡癌腫瘤細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,分別使用18F-FDG、99mTc-MIBI、99mTc-N（NOET）2和99mTc-RGD-4CK這幾種顯像機(jī)制各不相同的腫瘤顯像劑對(duì)荷瘤小鼠進(jìn)行顯像和生物分布研究,比較NCI-H358腫瘤細(xì)胞對(duì)不同顯像劑的攝取并與18F-FDG進(jìn)行對(duì)比,試圖尋找診斷高分化肺腫瘤時(shí)敏感性更高的顯像劑,降低18F-FDG顯像的假陰性率。
方法:1建立動(dòng)物模型:細(xì)胞株NCI-H358保存在含15%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中,置37℃體積分?jǐn)?shù)5%CO2及飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)至所需濃度,收獲指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞接種于BALB/C裸小鼠右前肢根部皮下,每只小鼠接種1×107/0.2ml,成瘤后隔日測(cè)量腫瘤最長(zhǎng)徑及與之垂直的最短徑,待腫瘤徑達(dá)0.7cm-1.0cm時(shí),選取腫瘤生長(zhǎng)良好、大小無(wú)顯著性差異的荷瘤小鼠20只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2分組顯像和分布:將20只荷瘤小鼠隨機(jī)分為a、b、c、d四組,每組5只,分別經(jīng)尾靜脈注射示蹤劑18F-FDG、99mTc-MIBI、99mTc-N（NOET）2和99mTc-RGD-4CK,進(jìn)行顯像和體內(nèi)生物分布研究。每只分別注射含7.4MBq（0.2mCi）/0.2ml顯像劑,注藥后120min腹腔注射10%水合氯醛麻醉小鼠并固定,行SPECT全身平面顯像。在采集的平面圖像上,以相同大小感興趣區(qū)（ROI）獲取腫瘤部位（T）和對(duì)側(cè)肢體相應(yīng)部位的放射性計(jì)數(shù)（NT）,計(jì)算T/NT放射性比值。圖像采集結(jié)束后立即將裸小鼠眼球取血,脫頸處死,迅速分離其腫瘤、心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、骨、對(duì)側(cè)肢體肌肉等臟器、組織,生理鹽水洗滌后粘干、稱重,置于試管中用γ井型探測(cè)儀測(cè)量各組織的放射性計(jì)數(shù),同時(shí)取1%注射活度做18F或99mTc的衰減校正,計(jì)算各臟器的每克組織百分注入活度（%ID/g）,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
3病理學(xué)檢查:各組中隨機(jī)選取荷NCI-H358人非小細(xì)胞肺癌裸小鼠瘤體的切塊,用4%多聚甲醛固定,48小時(shí)后,石蠟包埋,行常規(guī)HE染色、肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A（SP-A）免疫組織化學(xué)染色及增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）免疫組織化學(xué)染色。
參考文獻(xiàn)
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[2]11C-Acetate can be Used in Place of 18F-Fluorodeoxyglucose for Positron Emission Tomography Imaging of Non-small Cell Lung Cancer with Higher Sensitivity for Well-Differentiated Adenocarcinoma[J].Hiroaki Nomori,Hidekatsu Shibata,Kimiichi Uno,Kenichi Iyama,Yumi Honda,Rumi Nakashima,Kazuya Sakaguchi,Tomoyuki Goya,Iwao Takanami,Kiyoshi Koizumi,Takashi Suzuki,Masahiro Kaji,Hirotoshi Horio.Journal of Thoracic Oncology.2008(12)
[3]Diagnosis and Differentiation of Bronchioloalveolar Carcinoma from Adenocarcinoma with Bronchioloalveolar Components with Metabolic and Anatomic Characteristics Using PET/CT[J].Goudarzi,Behnaz,Jacene,Heather A,Wahl,Richard L.The Journal of Nuclear Medicine.2008(10)
[4]Bronchioloalveolar Lung Cancer[J].Douglas Arenberg.Chest.2007(3)
[5][1]張建陽(yáng).~（99m）Tc-RGD-4CK、~（99m）Tc-N（NOET）_2、~（99m）Tc-MIBI與~（18）F-FDG在荷NCI-H358肺癌裸鼠模型中的對(duì)比研究[D].河北醫(yī)科大學(xué),2010.