背景及概述[1][2]
光黃素為核黃素的分解產(chǎn)物。核黃素營養(yǎng)狀況的常用評價(jià)方法是測定尿中核黃素含量。尿中核黃素的測定方法有微生物法、高效液相色譜法和熒光法上等，微生物法手續(xù)繁瑣，僅在早年使用，現(xiàn)已不用。高效液相色譜法不成熟，且需要一定的設(shè)備，成本高、速度慢。
目前我國常用硅鎂吸附劑凈化熒光法，此法測定過程要求避光并盡快完成，操作條件難控制，并且效率低，大批量測定較困難。尿中核黃素大多以游離形式存在，游離核黃素對光極為敏感，堿性條件下光照下即分解產(chǎn)生光黃素，光黃素的三氯甲烷溶液具有較強(qiáng)的熒光發(fā)射，在250 nm 內(nèi)熒光強(qiáng)度是穩(wěn)定的，且不受光的影響，故可在激發(fā)波長450 nm、發(fā)射波長5 10 n m處測定。
結(jié)構(gòu)
應(yīng)用[1-2]
光黃素主要被用作分析試劑。其應(yīng)用舉例如下：
1. 光黃素?zé)晒夥y定尿中核黃素。
光黃素?zé)晒夥y定食品中核黃素，所用的核黃素標(biāo)準(zhǔn)液濃度為100 g/m1，濃度較高以至于核黃素不能完全溶解；有實(shí)驗(yàn)所用方法中，核黃素標(biāo)準(zhǔn)貯備液及核黃素標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制沿用硅鎂吸附劑凈化熒光法中核黃素標(biāo)準(zhǔn)液的配制，因其濃度小，核黃素完全溶解。用此方法與硅鎂吸附劑凈化熒光法測定尿中核黃素含量，結(jié)果經(jīng)兩樣本資料檢驗(yàn)，表明兩種方法測定結(jié)果無顯著性差異。
此方法與硅鎂吸附劑凈化熒光法比較：
(l) 硅鎂吸附劑凈化熒光法要求始終在暗室進(jìn)行，并且熱蒸餾水溫度應(yīng)始終控制在50 ℃-60 ℃ ，操作條件難控制；光黃素?zé)晒夥ㄖ灰笤诒芄鈼l件下進(jìn)行。
(2) 硅鎂吸附劑凈化熒光法中，尿樣要硅鎂吸附劑，由于尿中雜質(zhì)干擾，尿樣過柱速度不同，個(gè)別樣品速度很慢，影響整批樣品測定進(jìn)程；光黃素?zé)晒夥ǚ磻?yīng)速度是相同的，可以進(jìn)行整批樣品的測定。
(3) 硅鎂吸附劑凈化熒光法要求試驗(yàn)結(jié)束后盡快測定，以免游離核黃素見光分解，造成結(jié)果偏差；光黃素?zé)晒夥ㄖ?，光黃素的三氯甲烷溶液最長在25 0min 內(nèi)熒光強(qiáng)度穩(wěn)定，而且不受光影響，所以可以在放置時(shí)間內(nèi)進(jìn)行下一批操作，節(jié)省時(shí)間。
(4) 硅鎂吸附劑凈化熒光法每批最多只能測定20 個(gè)樣品，時(shí)間約為3 h，效率低，光黃素?zé)晒夥颗鷾y定20 個(gè)，可以在照射60min 時(shí)和樣品處理完放置時(shí)進(jìn)行下一批操作，大大節(jié)省時(shí)間，平均每批可以在l h 內(nèi)測完。
本法是由光黃素?zé)晒夥y定食品中核黃素改進(jìn)而來，故在測定尿中核黃素含量時(shí)，由于尿液樣品保存于酸性環(huán)境中，必須對氫氧化鈉加入量進(jìn)行調(diào)整，使核黃素光解完全。
2. 光黃素?zé)晒夥y定保健食品中的維生素B2。
食品中天然存在的維生素B2 一般呈結(jié)合形式，與磷酸和蛋白等結(jié)合成復(fù)合化合物。此種結(jié)合型維生素B2 對光比較穩(wěn)定。國標(biāo)法測定維生素B2 即是針對食品中天然存在的維生素B2 而制定的，由于食品成分比較復(fù)雜，試樣處理繁瑣費(fèi)時(shí)。
而保健食品中的維生素B2 大多以游離形式存在，且試樣成分相對簡單，如采用國標(biāo)法測定既耗時(shí)又費(fèi)試劑。游離維生素B2 對光極為敏感，光照下即分解產(chǎn)生光黃素。有研究參考日本衛(wèi)生試驗(yàn)法食品中維生素B2 的測定方法，利用維生素B2 分解為光黃素這一反應(yīng)，以光黃素?zé)晒夥ǘ繙y定保健食品中的維生素B2 含量，方法簡便、快速，且準(zhǔn)確度及精密度都能滿足分析要求。
測定方法[3]
光黃素測定方法：取光黃素對照品10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入水約50 mL及冰醋酸1 mL后超聲(功率120 W，頻率40 kHz)處理5min，置70 ℃水浴至溶解，冷卻至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻，精密移取1 mL置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得光黃素對照品溶液；精密稱取各批樣品適量，同法制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得供試品溶液。精密量取光黃素對照品溶液20 μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約達(dá)滿量程的20%；再準(zhǔn)確量取光黃素對照品溶液和供試品溶液各20 μL注入液相色譜，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的2倍。
主要參考資料
[1] 羅仁才, 黃磊, 王正, 等. 光黃素?zé)晒夥y定尿中核黃素的研究[J]. 營養(yǎng)學(xué)報(bào), 2004, 26(5): 396-399.
[2] 王永芳, 李敏. 光黃素?zé)晒夥y定保健食品中的維生素 B2 的方法研究[J]. 中國食品衛(wèi)生雜志, 2000, 12(2): 20-22.
[3] 張紅霞, 黃榮清, 肖炳坤, 等. 核黃素, 光黃素, 光色素及其他有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜測定[J]. 藥物分析雜志, 2010 (1): 67-70.