背景及概述[1][2]
地榆為常用的傳統(tǒng)中草藥，性寒，味苦酸，無毒；歸肝、肺、腎和大腸經(jīng)。有涼血止血，清熱解毒，培清養(yǎng)陰，消腫斂瘡等功效。現(xiàn)代藥理實驗表明，地榆具有止血、抗菌、抗炎、抗腫瘤等作用。地榆含有多種化學(xué)成分，其中三萜皂苷為其主要的化學(xué)成分。據(jù)文獻報道，地榆藥材中地榆皂苷Ⅰ的含量為4.39％-5.57％，地榆皂苷Ⅱ的含量 為0.440％-0.511％。可見地榆中的主要皂苷類成分為地榆皂苷Ⅰ，地榆皂苷Ⅰ的含量為地榆 皂苷Ⅱ的十倍。此外，地榆總皂苷中，地榆皂苷Ⅰ的含量為84.39％-85.75％，地榆皂苷Ⅱ含量為3.440％-4.483％。近年來，據(jù)報道，地榆皂苷Ⅱ有升高紅細胞、收縮血管、止血、抗真菌、抗腫瘤等作 用，因此地榆皂苷Ⅱ藥物研究前景非常廣闊。
應(yīng)用[2-3]
近年來，據(jù)報道，地榆皂苷Ⅱ有升高紅細胞、收縮血管、止血、抗真菌、抗腫瘤等作用，因此地榆皂苷Ⅱ藥物研究前景非常廣闊。
1）抗腫瘤：地榆皂苷Ⅱ是地榆總皂苷中具有抗腫瘤活性的主要成分。在胃癌細胞BGC-823 及乳腺癌細胞MDA-MB-435 中，地榆皂苷Ⅱ可以激活線粒體凋亡通路，導(dǎo)致細胞凋亡，抑制細胞的增殖。在乳腺癌細胞MDA-MB-231 和MCF-7中，地榆皂苷Ⅱ能引起細胞周期阻滯，并且通過上調(diào)活性氧(ROS) ，激活JNK 及其下游凋亡通路，誘導(dǎo)細胞凋亡。誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡是許多化療藥物抗腫瘤的重要機制。
2）免疫調(diào)節(jié)功能。選取地榆顆粒、地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ作為潛在的藥物活性物質(zhì)，對其刺激免疫細胞的增殖和細胞因子的分泌功能等進行較為系統(tǒng)的研究。，采用MTT法研究地榆顆粒及其組分在體外對小鼠脾臟淋巴細胞的增殖作用，結(jié)果表明地榆顆粒、地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ在0.2-125μg/m L濃度范圍內(nèi)均能夠顯著的促進小鼠脾臟淋巴細胞增殖(P<0.01)，對濃度存在依賴性。第二，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法研究其對小鼠淋巴細胞分泌白細胞介素-2(IL-2)，白細胞介素-4(IL-4)，白細胞介素-10(IL-10)，白細胞介素-12(IL-12)，干擾素-γ(IFN-γ)。結(jié)果表明地榆顆粒、地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ在0.2-125μg/m L濃度范圍內(nèi)，對細胞因子IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ的分泌具有明顯的促進作用(P<0.05)，且分泌IL-2、IL-12、IL-10和IFN-γ的水平隨著濃度的升高逐步增強，對于分泌IL-4的水平，則隨著濃度的升高逐漸降低，在濃度為5-125μg/m L時，與陽性對照組相比明顯抑制了IL-4的分泌。
制備[1]
一種地榆皂苷Ⅱ的制備方法，包括步驟：1)取地榆粉碎，加入地榆質(zhì)量的6-12倍量50-80％乙醇回流提取1-3次，每次1-3h，合并提取液，靜置冷卻；2)將提取液中的乙醇體積分數(shù)調(diào)至85-95％，加堿調(diào)pH值至12-14，靜置8-14小時， 抽濾得到上清液；3)將上清液減壓濃縮成干粉，加入干粉質(zhì)量的50-80倍量的4％NaOH溶液，70-90℃ 水浴1-5h，TLC檢測地榆皂苷Ⅰ完全水解，然后冷卻至室溫，以稀鹽酸調(diào)pH值至1-3，過濾后收集濾渣，將濾渣水洗至中性，加入濾渣質(zhì)量的8-12倍量的水進行攪拌分散0.5-4h，過濾，得提取品；4)將步驟3所得的粗提取品用粗提取品質(zhì)量的5-12倍量有機溶劑溶解結(jié)晶，或用 制備液相分離，得到白色晶體或粉末狀的地榆皂苷Ⅱ純品。
具體為：取地榆飲片1kg，適當粉碎后加10倍量70％乙醇回流提取2次，每次1.5h，濾過，合并2次提取液，靜置放冷后，調(diào)乙醇體積分數(shù)至90％，加入NaOH調(diào)pH值至13-14，靜置 過夜12h，濾液抽濾得到上清液。上清液減壓濃縮至干，用60倍量4％NaOH溶液，82℃水浴3h， TLC檢測地榆皂苷Ⅰ已全部水解。取出，放冷到室溫，稀鹽酸調(diào)pH值至1-2，過濾，水洗至中性，收集濾渣，濾渣至10倍量水中攪拌分散約1小時，過濾，得地榆皂苷Ⅱ粗品30g，得率3％，地榆皂苷Ⅱ含量為70％。將地榆皂苷Ⅱ粗品用 8倍的甲醇溶解重結(jié)晶，得到地榆皂苷Ⅱ白色晶體純品20g，得率約2％，地榆皂苷Ⅱ含量約為99.2％。所述HPLC檢測條件：agⅠlent 1260 液相，流速1ml/mⅠn；AgⅠlent extend-C18色譜柱(4.6*250mm，5μm)，檢測波長203nm；以甲醇-水(70∶30)為流動相等度洗脫。
地榆皂苷Ⅱ鑒別：白色無定型粉末(MeOH)。HNMR(300MHz，pyridine-d5)δ：1.11 (3H，d，J＝6.4Hz，30-CH3)，0.86，0.94，1.08，1.26，1.42，1.74(each 3H，s，6×CH3)，3.04 (1H，br s，H-18)，3.31(1H，m，H-3)，4.76(1H，d，J＝6.8Hz，Ara H-1′)，5.52(1H，br s，H- 12)。
主要參考資料
[1] CN201810268835.3 一種地榆皂苷Ⅱ的制備方法
[2] 地榆皂苷Ⅱ抑制腫瘤細胞增殖和誘導(dǎo)其凋亡的作用
[3] 地榆及其提取物免疫調(diào)節(jié)功能和機制研究