背景及概述[1][2]
歐夾竹桃甙丙是一種歐夾竹桃甙丙科的常綠灌木或小喬木，具有觀賞價(jià)值。歐夾竹桃甙丙因其毒性而聞名，也是世界上最毒的植物之一，人類(lèi)和家畜因歐夾竹桃甙丙中毒甚至死亡的案（事）件時(shí)有報(bào)道。攝入歐夾竹桃甙丙會(huì)產(chǎn)生典型的強(qiáng)心苷中毒臨床癥狀，主要表現(xiàn)為胃腸道不適、惡心和嘔吐，其次為神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，包括虛弱、精神錯(cuò)亂和心臟癥狀，通常表現(xiàn)為由于傳導(dǎo)問(wèn)題引起的心動(dòng)過(guò)緩和房室傳導(dǎo)阻滯導(dǎo)致纖顫。
檢測(cè)[1]
LC-MS/MS測(cè)定血液、肝組織中的歐歐夾竹桃甙丙苷：
目前對(duì)體內(nèi)歐歐夾竹桃甙丙苷的檢測(cè)方法主要有薄層色譜法、熒光分光光度法、 高效液相色譜法和質(zhì)譜法。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（liquid chromatographytandem mass spectrometry，LC-MS/MS）結(jié)合了液相色譜分離效率高和質(zhì)譜化合物鑒定功能強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，是分析生物樣品中復(fù)雜和難以揮發(fā)的強(qiáng)心苷的理想方法。
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 溶液配制
稱(chēng)取對(duì)照品歐歐夾竹桃甙丙苷 10 mg 于 10 mL 容量瓶中，精密稱(chēng)定，加入甲醇溶解，稀釋?zhuān)ㄈ?，配制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的歐歐夾竹桃甙丙苷甲醇儲(chǔ)備液，置于冰箱中冷凍保存，待用。實(shí)驗(yàn)中所用其他濃度的對(duì)照品溶液均由上述對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋而得。
2 樣品前處理方法
取血液1mL或肝組織（已研磨成勻漿）1g，用2mL乙醚進(jìn)行提取， 渦旋混合3 min，以離心半徑 12 cm，2500 r/min，離心 3 min。將上清液轉(zhuǎn)移至另一試管中，水浴 60℃下?lián)]干。殘留物中加入200 μL甲醇復(fù)溶，供LC-MS/MS分析。
3儀器條件
色譜條件：色譜柱為 Agilent ZORBAX SB-C18柱（150 mm×2.1 mm，5μm），前接 Phenomenex保護(hù)柱；以20 mmol/L 乙酸銨（含0.1%甲酸）溶液為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。流速：0.2 mL/min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10μL。
質(zhì)譜條件：采用電噴霧正離子化（ESI+），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）模式檢測(cè)；離子源電壓（IS）4 500 V，氣簾氣（CUR）25 psi， 霧化氣（GS1）35 psi， 輔助氣（GS2）40 psi，離子源溫度（TEM）500 ℃。
選用歐歐夾竹桃甙丙苷的兩對(duì)母離子-子離子對(duì)進(jìn)行定性分析，分別為 m/z 577.4/373.3、 m/z 577.4/355.3，將離子對(duì)m/z 577.4/373.3作為定量離子對(duì)。
應(yīng)用 [2]
DNA雙鏈斷裂是最嚴(yán)重的DNA損傷形式。如果得不到有效的修復(fù)，將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。DNA雙鏈斷裂損傷修復(fù)主要利用同源重組和非同源性末端接合(Non-homologous end joining,NHEJ)機(jī)制。同源重組在其中起主要作用，通過(guò)利用未受損傷的另一條染色體作為模版，來(lái)修復(fù)與其相似的受損傷的染色體；非同源性末端接合的修復(fù)方式屬于不精確修復(fù)，所產(chǎn)生的DNA往往導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定而最終引起細(xì)胞死亡。參與同源重組修復(fù)的基因包括RAD51、RAD54、BRCA1、BRCA2等。RAD51是有絲分裂細(xì)胞中催化DNA同源重組修復(fù)過(guò)程中同源配對(duì)的唯一因子。而XRCC1是非同源末端接合修復(fù)的主要因子。因此，本領(lǐng)域迫切需要研發(fā)能夠有效誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞DNA雙鏈斷裂損傷、腫瘤細(xì)胞凋亡的相關(guān)藥物。
CN201510511959.6提供一種能夠有效誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞DNA雙鏈斷裂損傷、腫瘤細(xì)胞凋亡的相關(guān)藥物。在本發(fā)明的方面，提供了一種歐歐夾竹桃甙丙苷或其藥用鹽的用途，其特征在于，用于制備(i)用于抑制DNA修復(fù)；(ii)用于降低腫瘤細(xì)胞的耐藥性的組合物或制劑。
在本發(fā)明的第二方面，提供一種非治療性的、體外抑制DNA修復(fù)的方法，其特征在于，包括步驟：
(a)將待處理的細(xì)胞與歐歐夾竹桃甙丙苷或其藥學(xué)上可接受的鹽接觸，從而抑制所述細(xì)胞中的DNA修復(fù)。
在本發(fā)明的第三方面，提供一種非治療性的、體外降低腫瘤細(xì)胞耐藥性或耐受性的方法，其特征在于，包括步驟：
(a)將所述的腫瘤細(xì)胞與歐歐夾竹桃甙丙苷或其藥學(xué)上可接受的鹽接觸，從而降低腫瘤細(xì)胞耐藥性或耐受性。圖1顯示了歐歐夾竹桃甙丙苷能夠有效誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
主要參考資料
[1] 翟金曉,嚴(yán)慧,沈敏,沈保華,劉偉.LC-MS/MS測(cè)定血液、肝組織中的歐歐夾竹桃甙丙苷[J].法醫(yī)學(xué)雜志,2018,34(06):585-589.
[2] CN201510511959.6 一種新型同源重組抑制劑