概述

2,2'-聯(lián)氮雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽是一種化學(xué)物質(zhì)，主要用作過(guò)氧化物酶底物，化學(xué)式是C₁₈H₂₄N₆O₆S₄，分子量是548.68，可用ABTS縮寫(xiě)表示。純凈的化合物呈現(xiàn)淺綠色至綠色，亮黃綠至深黃綠色的粉末狀態(tài)。

用途

1.常用于游離氯的光譜試劑，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的顯色底物，過(guò)氧化物酶的底物，用于ELISA 實(shí)驗(yàn)，該底物產(chǎn)生一種可溶性的顯綠色的螯合物，可使用405 nm光譜讀取OD值，可使用1%SDS終止反應(yīng)[1-2]。

2.用作抗氧化劑[3-5]。2 ,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽，如果與過(guò)二硫酸鉀反應(yīng)，可以生成綠色的ABTS自由基。該自由基在734nm有吸收，所以，通過(guò)檢測(cè)734nm的吸光度，可以測(cè)定的其濃度。一個(gè)物質(zhì)加入到ABTS自由基溶液后，如果734nm的吸光度降低，則說(shuō)明該物質(zhì)具有自由基清除活性，屬于抗氧化劑。該法稱(chēng)為ABTS自由基清除法，可以用評(píng)價(jià)植物（或中草藥抽提物）、純化合物的抗氧化能力的。此外，可以作為對(duì)血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液或各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力進(jìn)行檢測(cè)的試劑盒。不過(guò)，ABTS自由基的生成需要過(guò)二硫酸鉀氧化，所以，是一個(gè)混合物。而且，反應(yīng)通常需要12小時(shí)，比較耗時(shí)。

儲(chǔ)存條件

密封、2-8℃保存。運(yùn)輸過(guò)程中需要冰袋運(yùn)輸。

酶活性實(shí)驗(yàn)

研究了使用ABTS作為HRP綴合物底物的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）的微技術(shù)。在4個(gè)底物的比較研究中，即; 5-氨基水楊酸（5AS），鄰苯二胺（OPD），O-聯(lián)甲苯胺（OT）和ABTS，對(duì)于HRP的敏感性，ABTS是最敏感，最穩(wěn)定，最具視覺(jué)效果的藍(lán)綠色[ 6]。 ABTS是典型的過(guò)氧化物酶底物。為了純化和表征，過(guò)氧化物酶陽(yáng)性轉(zhuǎn)化體在培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生活性蛋白的條件下大規(guī)模培養(yǎng)（XL）。培養(yǎng)160小時(shí)后，獲得相對(duì)于底物ABTS的55,000U / L的活性，并收獲含有過(guò)氧化物酶的上清液。以ABTS為底物，當(dāng)H₂O₂濃度超過(guò)0.125mM時(shí)，過(guò)氧化物酶活性顯著下降，表明該酶被H₂O₂抑制。反應(yīng)速率取決于測(cè)試的底物，其值在31.2和125μM之間[7]。

使用溫度控制的多模板讀數(shù)器或者在UV / Vis分光光度計(jì)中光度測(cè)定酶活性。通過(guò)添加酶引發(fā)反應(yīng)。在25℃，在適當(dāng)?shù)幕|(zhì)波長(zhǎng)下，在10分鐘內(nèi)測(cè)量酶活性。一個(gè)單位（1U）定義為每分鐘轉(zhuǎn)化1μmol底物的酶量。各種H₂O₂濃度（0-1250μM，酶濃度（0.27-54 nM）和底物濃度）用于測(cè)定酶活性。在pH3.8的100mM乙酸鈉緩沖液和最終H₂O₂濃度下測(cè)定rPsaDyP對(duì)ABTS的活性。在420nm（ε42036,000Lmol-1 cm-1）下研究ABTS陽(yáng)離子自由基的產(chǎn)生[7]。

參考文獻(xiàn)

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[7]Lauber C, et al. Identification, heterologous expression and characterization of a dye-decolorizing peroxidase of Pleurotus sapidus. AMB Express. 2017 Aug 23;7(1):164.