背景[1-3]
HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系是一種正常人腸上皮細(xì)胞系，通常用于研究腸道生理和病理過(guò)程。這種細(xì)胞系具有正常的染色體數(shù)和穩(wěn)定的遺傳學(xué)特性，能夠模擬人體腸道上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。
HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系通常用于研究腸道微生物組、腸道免疫系統(tǒng)、腸道神經(jīng)系統(tǒng)、腸道細(xì)胞因子、腸道營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收和腸道疾病等方面的實(shí)驗(yàn)。這些研究有助于深入了解腸道生理和病理過(guò)程，為臨床診斷和治療提供重要的參考依據(jù)。
HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系是一種來(lái)源于人類結(jié)腸的正常腸上皮細(xì)胞系。該細(xì)胞系具有以下特點(diǎn)：
來(lái)源于人類結(jié)腸：HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系是從人類結(jié)腸中分離出來(lái)的，因此具有與人類腸道上皮細(xì)胞相似的形態(tài)和生理特性。
正常細(xì)胞系：HIEC-6細(xì)胞系在正常情況下不會(huì)發(fā)生癌變，因此可以作為研究人類腸道生理和病理過(guò)程的理想模型。
可傳代性好：HIEC-6細(xì)胞系具有較高的傳代穩(wěn)定性，可以在體外連續(xù)培養(yǎng)和擴(kuò)增。
可誘導(dǎo)分化：HIEC-6細(xì)胞系可以被誘導(dǎo)分化為多種不同類型的細(xì)胞，如杯狀細(xì)胞、柱狀細(xì)胞等，這為研究腸道上皮細(xì)胞的分化和功能提供了便利。
HIEC-6細(xì)胞系已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于腸道疾病的研究，如炎癥性腸病、腸道腫瘤等。同時(shí)，它也可以作為藥物篩選和毒性評(píng)價(jià)的模型，以及用于開發(fā)新型藥物和治療方法。
HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系
HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主。
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
應(yīng)用[4-5]
HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系可以用于ERGIC1基因在結(jié)直腸癌增殖侵襲中的作用及臨床相關(guān)性研究
通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ERGIC1基因在結(jié)直腸癌和癌旁組織中的表達(dá)差異;通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探究ERGIC1在人CRC細(xì)胞系和HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系中的表達(dá)以及過(guò)表達(dá)ERGIC1后對(duì)人CRC細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響,為探討ERGIC1基因能否作為結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵分子靶標(biāo)奠定理論基礎(chǔ),有助于揭示結(jié)直腸癌增殖及進(jìn)展的相關(guān)生物學(xué)機(jī)制。
方法:1、臨床樣本收集:規(guī)范化收集實(shí)施結(jié)直腸癌根治術(shù)的40例結(jié)直腸癌組織標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)組,相應(yīng)癌旁未受侵組織為對(duì)照組。
2、通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測(cè)ERGIC1基因在結(jié)直腸癌和癌旁組織中的表達(dá)情況。
3、通過(guò)免疫組化(Immunohistochemical,IHC)和免疫熒光染色(Immunofluorescence,IF)檢測(cè)ERGIC1蛋白在結(jié)直腸癌和癌旁組織中的表達(dá)差異和具體表達(dá)部位。
4、RT-PCR檢測(cè)ERGIC1在HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系和人CRC細(xì)胞系HT-29、HCT116、SW480、SW620中的表達(dá)水平,并篩選出表達(dá)量最低的CRC細(xì)胞系。
5、ERGIC1過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建:購(gòu)買ERGIC1基因的c DNA片段,擴(kuò)增出目的片段,連接到特定的過(guò)表達(dá)載體上,篩選出陽(yáng)性克隆進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng),提取質(zhì)粒。提取的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到SW480細(xì)胞系中,過(guò)表達(dá)24-48h后,收取樣品進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)。
6、流式細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、CCK8實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)表達(dá)ERGIC1后對(duì)CRC細(xì)胞凋亡、增殖、遷移和侵襲的影響。
結(jié)果:1、ERGIC1基因在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)和臨床意義RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:相比較結(jié)直腸癌組織,ERGIC1在癌旁組織中顯著高表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.006)。IF檢測(cè)結(jié)果顯示:ERGIC1蛋白在結(jié)直腸癌中的細(xì)胞定位主要定在胞漿和質(zhì)膜上。IHC檢測(cè)結(jié)果顯示:ERGIC1蛋白在癌組織中的表達(dá)顯著低于癌旁組織(P﹤0.01),并且其表達(dá)與腫瘤p TNM分期(P=0.014)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.047)以及p53突變(P=0.044)顯著相關(guān),與性別、年齡、腫瘤大小和神經(jīng)脈管侵犯無(wú)關(guān)。通過(guò)對(duì)患者近期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和死亡的分析發(fā)現(xiàn),ERGIC1低表達(dá)者和高表達(dá)者其術(shù)后短期預(yù)后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.695)。
2、ERGIC1基因在CRC細(xì)胞系和HIEC-6正常人腸上皮細(xì)胞系中的表達(dá)情況RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:CRC細(xì)胞系HT-29、HCT116、SW480、SW620中ERGIC1的表達(dá)量均顯著低于正常人腸上皮細(xì)胞系HIEC-6(P<0.0001;P<0.001;P<0.0001;P<0.0001),在SW480細(xì)胞系中的表達(dá)量最低。
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