喜樹堿，是1966年由美國學(xué)者從我國特有樹種喜樹(Camptothecaacuminata)中提取得到的具有廣譜抗腫瘤活性的生物堿，并由此而命名。10-羥基喜樹堿是喜樹堿的天然衍生物，是我國廣泛臨床用的抗腫瘤藥物。此外，喜樹堿和10-羥基喜樹堿是目前已獲美國食品及藥品管理局(FDA)批準臨床應(yīng)用的喜樹堿類抗腫瘤藥物CPT-11(Irinotecan，用于治療直腸/結(jié)腸癌)、TPT(Topotecan，用于治療卵巢癌)的半合成前體化合物。

傳統(tǒng)生產(chǎn)方法

目前，喜樹堿一般從喜樹中提取得到，10-羥基喜樹堿主要經(jīng)由喜樹堿生物合成制備。

國家知識產(chǎn)權(quán)局專利局于1996年5月8日公開了一種喜樹堿的提取方法，該發(fā)明專利是以喜樹的果實或根皮為原料提取喜樹堿。它采用磨粉→水煮→煮液濃縮→膏狀物→乙醇分離樹膠雜質(zhì)→析出粗品→氯仿混合液多次重結(jié)晶得到產(chǎn)品的工藝路線。

1999年12月22日，國家知識產(chǎn)權(quán)局專利局公開了一種喜樹堿的生產(chǎn)方法，該發(fā)明專利以喜樹葉為主要原料，果實為輔助原料生產(chǎn)喜樹堿。它采用原料粉碎→乙醇滲漉→超臨界二氧化碳萃取剩余物質(zhì)→濃縮滲漉液和萃取液→大孔吸附樹脂柱層析→重結(jié)晶后得到產(chǎn)品的工藝路線。

2000年4月26日又公開了另外一種喜樹堿的生產(chǎn)方法，該發(fā)明專利涉及一種以喜樹葉及果實為原料，生產(chǎn)喜樹堿的工藝方法。它采用原料粉碎→乙醇及水滲漉→濃縮滲漉液→大孔吸附樹脂柱層析→重結(jié)晶后得到產(chǎn)品的工藝路線。

上述三種方法在以喜樹果實為原料生產(chǎn)喜樹堿時，均未考慮到原料中尚含有10-羥基喜樹堿(含量約為喜樹堿的10％)，提取純化后所得產(chǎn)品可創(chuàng)造相當(dāng)于喜樹堿產(chǎn)品的產(chǎn)值(10-羥基喜樹堿價格為喜樹堿的10倍以上)，因而造成了10-羥基喜樹堿資源的浪費。

技術(shù)內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種以2～40天的喜樹幼苗或喜樹果實為原料，產(chǎn)品得率高、生產(chǎn)成本低的喜樹堿、10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法。

為了達到上述目的，本發(fā)明以2～40天的喜樹幼苗或喜樹果實為原料經(jīng)粉碎→乙醇滲漉萃取→萃取液濃縮至濃水溶液→大孔吸附樹脂柱層析→不同溶劑解吸液濃縮分別得喜樹堿、10-羥基喜樹堿粗品→分別重結(jié)晶后得喜樹堿、10-羥基喜樹堿的工藝路線。

本發(fā)明的優(yōu)點是

1、2～40天的喜樹幼苗中10-羥基喜樹堿含量可與喜樹堿含量相當(dāng)。以2～40天的喜樹幼苗為原料生產(chǎn)喜樹堿、10-羥基喜樹堿，產(chǎn)品得率高，生產(chǎn)成本低，經(jīng)濟效益十分可觀。

2、以喜樹果實為原料生產(chǎn)喜樹堿、10-羥基喜樹堿，可避免資源浪費。

3、本發(fā)明以2～40天喜樹幼苗為原料，喜樹堿產(chǎn)品收率為0.4‰，10-羥基喜樹堿產(chǎn)品收率為0.2‰；以喜樹果實為原料，喜樹堿產(chǎn)品收率為0.3‰，10-羥基喜樹堿產(chǎn)品收率為0.02‰。

4、本發(fā)明的喜樹堿產(chǎn)品純度可超過97.5％，10-羥基喜樹堿產(chǎn)品純度可達90％。

5、本發(fā)明在生產(chǎn)過程中不使用毒性高的氯仿和甲醇，環(huán)境污染小，對生產(chǎn)人員的毒害小。

具體實施

將發(fā)芽2～40天的喜樹幼苗去除果皮后60～80℃烘干24小時，粉碎至20目。取10千克喜樹幼苗粉經(jīng)7倍體積60％乙醇滲漉萃取后，將所得萃取液濃縮至原體積的1/4。濃縮液直接通過惰性大孔吸附樹脂柱進行吸附，吸附后用蒸餾水洗滌至基本無色，以20倍柱體積乙酸乙酯解吸后，再以20倍柱體積乙酸乙酯/乙醇(體積比1∶1)。分別收集合并乙酸乙酯解吸液及乙酸乙酯/乙醇解吸液，濃縮后分別析出喜樹堿、10-羥基喜樹堿粗品，最后分別經(jīng)乙酸乙酯/乙醇(體積比1∶1)重結(jié)晶得到喜樹堿產(chǎn)品4克(得率為0.4‰)、10-羥基喜樹堿產(chǎn)品2克(得率為0.2‰)。