背景[1-3]
大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)Elisa試劑盒是一種用于體外定量檢測大鼠樣本中TNF-β濃度的實(shí)驗(yàn)試劑盒。這些試劑盒主要用于科研目的，不適用于臨床診斷。以下是關(guān)于大鼠腫瘤壞死因子β（TNF-β）ELISA試劑盒的一些詳細(xì)信息：
大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)類型：雙抗體夾心法。
檢測范圍：4.68-300 pg/mL（特殊要求可定制）。
靈敏度：2.72 pg/mL。
種屬：大鼠。
保存溫度：2-8℃。
大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)Elisa試劑盒樣本類型：適用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清和其他生物液體。
在使用大鼠腫瘤壞死因子β（TNF-β）ELISA試劑盒時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，包括樣本的采集與處理、試劑的配制、溫育時(shí)間、孵育溫度等，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時(shí)，應(yīng)注意試劑的保存條件，避免使用過期的試劑，并在操作過程中遵循實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范。
大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)Elisa試劑盒
使用大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)Elisa試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要按照以下步驟進(jìn)行：
實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜,37℃反應(yīng)60分鐘。
3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4.每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液）100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6.依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。
應(yīng)用[4][5]
大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)Elisa試劑盒可以用于肝硬化大鼠巨脾中M-CSF、TNF-β、IFN-γ和IL-10的表達(dá)水平分析
探討巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、腫瘤壞死因子β(TNF-β)、干擾素γ(IFN-γ)和白介素10(IL-10)在大鼠肝硬化巨脾中的表達(dá)及其意義。
方法:將雄性健康SD大鼠62只隨機(jī)分為模型組(n=50)和對照組(n=12)。模型組用40%的CCL4花生油溶液配合白酒溶液制成肝硬化脾亢動(dòng)物模型,對照組同步進(jìn)行生理鹽水灌胃處理。后用大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)Elisa試劑盒、蛋白印記法和RT-PCR方法檢測兩組脾臟中M-CSF、TNF-β、IFN-y和IL-10的表達(dá),并運(yùn)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析,比較兩組的差異。
大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)Elisa試劑盒結(jié)果:M-CSF、TNF-β、IFN-y和IL-10在模型組中的陽性表達(dá)率分別為60.71%、78.57%、64.29%和87.71%,對照組中分別為25%、33.33%、16.67%和50%,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。M-CSF、TNF-β、IFN-y和IL-10在模型組中的蛋白表達(dá)相對強(qiáng)度分別為0.63±0.58,1.06±0.49,0.99±0.38和1.12±0.42,對照組中分別為0.18±0.12,0.52±0.27,0.38±0.28和0.60±0.32,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。M-CSF、TNF-β、IFN-γ和IL-10在模型組中的mRNA相對表達(dá)水平分別為2.06±0.11,4.07±0.19,2.98±0.11和7.94±0.27,對照組中分別為1.01±0.05,1.06±0.11,1.00±0.31和1.02±0.08,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
參考文獻(xiàn)
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