背景技術(shù)
索馬魯肽是一種胰高血糖素樣肽?1(GLP?1)受體激動(dòng)劑，通過(guò)介導(dǎo)GLP?1受體，以葡萄糖依賴的方式，促進(jìn)胰島素分泌，抑制胰高血糖素分泌，從而達(dá)到降糖目的，常用于治療成人II型糖尿病。索馬魯肽的長(zhǎng)效機(jī)制是基于對(duì)結(jié)構(gòu)的修飾，把肽鏈第26位的賴氨酸位置連接上18碳脂肪二酸側(cè)鏈，修飾的碳鏈增大了索馬魯肽的分子量，并且對(duì)白蛋白的親和力增強(qiáng)5?6倍，避免快速被腎臟清除并防止代謝性降解，延長(zhǎng)體內(nèi)半衰期。索馬魯肽中間體29肽【CAS號(hào)：1169630?82?3】，又名司美格魯肽29肽主鏈、Semaglutide Intermediate P29、GLP?1(9?37)，是索馬魯肽原料藥合成的關(guān)鍵中間體。目前主要通過(guò)發(fā)酵制備索馬魯肽中間體29肽，得到的索馬魯肽中間體29肽會(huì)產(chǎn)生一些列雜質(zhì)，這些雜質(zhì)將增加索馬魯肽成品純化的難度、影響成品的質(zhì)量。
目前，常使用高效液相色譜法檢測(cè)供試品溶液中有關(guān)物質(zhì)的含量。專利申請(qǐng)CN117805269A公開了一種司美格魯肽注射液有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其以磷酸鹽溶液稀釋司美格魯肽注射液，得供試品溶液；以十八烷基硅烷鍵合硅膠填料色譜柱為固定相，以磷酸鹽緩沖液?乙腈為流動(dòng)相A，以乙腈-異丙醇水溶液為流動(dòng)相B，采用高效液相色譜法檢測(cè)所述供試品溶液中司美格魯肽注射液有關(guān)物質(zhì)的含量。但該方法檢測(cè)速度慢，且司美格魯肽與索馬魯肽中間體疏水性差異大，不適宜分析索馬魯肽中間體中的有關(guān)物質(zhì)。 目前，尚未公開索馬魯肽中間體有關(guān)物質(zhì)的分析方法。
因此，有必要開發(fā)出一種方法簡(jiǎn)單、成本低、專屬性和精密度好、靈敏度高、耐用性好的檢測(cè)索馬魯肽中間體有關(guān)物質(zhì)的分析方法。
檢測(cè)方法[1]
一、溶液配制
稀釋液的配制：稱取三羥甲基氨基甲烷12.1g，加入乙腈100mL及適量水使溶解后，用水稀釋至1000mL，用鹽酸調(diào)pH至8.0，混勻，即得?？瞻兹芤旱呐渲婆c稀釋液相同。
流動(dòng)相A的配制：稱取高氯酸鈉9.8g，加入乙腈100mL及適量水溶解后，用水稀釋至1000mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH到1.7，混勻，即得。
流動(dòng)相B的配制：取乙腈600mL、甲醇200mL與水200mL，混勻，即得。
索馬魯肽中間體對(duì)照品溶液的配制：稱取25mg索馬魯肽中間體對(duì)照品至50mL容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度，混勻，即得。平行配制兩份，分別作為對(duì)照品溶液和檢查對(duì)照品溶液。
索馬魯肽中間體供試品溶液的配制：稱取25mg索馬魯肽中間體供試品至50mL容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度，混勻，即得。
雜質(zhì)混合溶液的配制：取雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6、雜質(zhì)7、雜質(zhì)8、雜質(zhì)9、雜質(zhì)10、雜質(zhì)11、雜質(zhì)12、適量，精密稱定，用稀釋液溶解并稀釋制成每1mL含雜質(zhì)1為6.25μg、雜質(zhì)2為2.5μg、雜質(zhì)3為2.5μg、雜質(zhì)4為2.5μg、雜質(zhì)5為5μg、雜質(zhì)6為6.25μg、雜質(zhì)7為1.25μg、雜質(zhì)8為2.5μg、雜質(zhì)9為2.5μg、雜質(zhì)10為2.5μg、雜質(zhì)11為35μg、雜質(zhì)12為1.25μg 的溶液。
索馬魯肽中間體標(biāo)記供試品的配制：稱取25mg索馬魯肽中間體供試品至50mL容量瓶中，加雜質(zhì)混合溶液10mL，用稀釋液溶解并稀釋至刻度，混勻，即得。
二、色譜條件
模式：LC；波長(zhǎng)：UV 214nm；色譜柱：Agilent Poroshell 120EC?C18，2.7μm，3mm×150mm；流速：0.6mL/min；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：40℃；自動(dòng)進(jìn)樣器溫度：5℃。
三、檢測(cè)結(jié)果
取10μL索馬魯肽中間體標(biāo)記供試品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，如圖所述，標(biāo)記供試品溶液中測(cè)得雜質(zhì)1+雜質(zhì)6為0.46％、雜質(zhì)2為0.09％、雜質(zhì)3為0.10％、雜質(zhì)4為0.20％、雜質(zhì)5為0.19％、雜質(zhì)7+雜質(zhì)12為0.09％、雜質(zhì)8為0.10％、雜質(zhì)9為0.08％、雜質(zhì)10為0.12％、 雜質(zhì)11為1.36％。
參考文獻(xiàn)
[1]南京漢欣醫(yī)藥科技有限公司. 一種司美格魯肽中間體29肽有關(guān)物質(zhì)的分析方法:CN202411926385.4[P]. 2025-04-25.