簡介

雙環(huán)己酮草酰二腙為白色晶狀粉末，溶于乙醇、堿性水溶液，對Cu2?具有特異性螯合能力。其核心價值在于“雙環(huán)己酮草酰二腙-Cu2?”顯色體系：在弱堿性介質(zhì)中，雙環(huán)己酮草酰二腙與Cu2?瞬間形成穩(wěn)定的藍色絡合物Cu(雙環(huán)己酮草酰二腙)2?，600nm處摩爾吸光度高，色度與銅濃度呈線性關系，裸眼可辨。實驗優(yōu)化表明，當1mol/LH?SO?4μL觸發(fā)CuO納米粒釋銅，并以0.2mol/L、pH9的Tris-HCl120μL維持堿度時，顯色靈敏度最高。利用該原理，研究者將CuO標記于CEA抗體，構(gòu)建夾心免疫傳感器[1]。

雙環(huán)己酮草酰二腙的性狀

雙環(huán)己酮草酰二腙比色法

Cu2?與雙環(huán)己酮草酰二胺（BCO）在弱堿性條件下可生成藍色絡合物Cu(BCO)2?，在600nm左右有明顯的吸收峰。研究人員在抗原與抗體特異性結(jié)合反應的基礎上，將CuO納米粒子與CEA抗體結(jié)合，溶液中存在CEA時，抗體可與其形成夾心免疫結(jié)構(gòu)，當加入一定量的酸后CuO可分解出Cu2?與溶液中的BCO發(fā)生絡合反應，使溶液由無色變?yōu)樗{色，藍色的深淺由CEA的濃度決定。裸眼觀測溶液的顏色便可以初步確定CEA的大致濃度范圍，進一步的定量分析則需通過溶液的吸光度值實現(xiàn)[1]。

BCO-Cu2?顯色體系的最佳條件

Cu2?與BCO的結(jié)合是在堿性條件下進行的，因此CuO分解時H?SO?的用量以及緩沖液的用量也會影響最終比色結(jié)果。分別加入不同體積（2、4、6、8、12、20μL）相同濃度（1mol/L）的H?SO?進行考察。結(jié)果表明，吸光度值隨著H?SO?用量的改變而發(fā)生改變，且顯色體系在H?SO?用量為4μL時效果最優(yōu)，因此選擇H?SO?的最佳用量為4μL。通過加入相同濃度（0.2mol/L，pH9）不同用量（50、80、120、200、250、320μL）的Tris-HCl溶液觀察其產(chǎn)生的影響。結(jié)果表明，吸光度值隨著Tris-HCl用量的改變而改變，且在用量為120μL時達到最優(yōu)顯色效果，因此選擇120μL為Tris-HCl的最佳用量[1]。

用途

雙環(huán)己酮草酰二腙（BCO）主要用作顯色配體：與Cu2?形成藍色絡合物，把CuO納米標記物釋放的Cu2?信號轉(zhuǎn)化為肉眼可見的顏色變化，從而實現(xiàn)對腫瘤標志物CEA的比色免疫檢測。例如：通常研究著以CuO作為納米標記物，并利用Cu2?與雙環(huán)己酮草酰二胺的顏色反應作為信號轉(zhuǎn)導策略，成功構(gòu)建了可實現(xiàn)CEA特異性檢測的比色免疫傳感器。該比色傳感器在檢測CEA過程中表現(xiàn)出較好的特異性、抗干擾性、重復性和穩(wěn)定性。同時該免疫傳感器在真實血清樣品的分析檢測中表現(xiàn)出良好性能，未來有望用于腫瘤的臨床分析與檢測[1]。

參考文獻

[1] 原源,張冰,文艷斐,等. 基于Cu2+和雙環(huán)己酮草酰二腙的比色免疫分析用于測定癌胚抗原 [J]. 分析試驗室, 2023, 42 (02): 222-227. DOI:10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2021.121504.