小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒是一種用于定量檢測(cè)小鼠血漿或血清中TAT含量的高效免疫學(xué)工具。凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（Thrombin-Antithrombin Complex, TAT）是凝血酶與其天然抑制劑抗凝血酶Ⅲ結(jié)合后形成的穩(wěn)定復(fù)合物。由于凝血酶在血液中半衰期極短，直接檢測(cè)困難，而TAT半衰期較長(zhǎng)且穩(wěn)定，因此TAT水平可敏感反映體內(nèi)凝血系統(tǒng)的激活狀態(tài)。TAT作為凝血系統(tǒng)激活的直接分子標(biāo)志物，在止血機(jī)制研究、血栓性疾病模型評(píng)估以及藥物凝血調(diào)控作用篩選等領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價(jià)值。
檢測(cè)原理
小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒通常采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法。其基本步驟如下：將抗小鼠TAT單克隆抗體預(yù)包被于酶標(biāo)板微孔中，加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品后，樣品中的TAT與包被抗體結(jié)合；洗板后加入生物素化的檢測(cè)抗體，形成“抗體-TAT-檢測(cè)抗體”夾心復(fù)合物；隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素結(jié)合；最后加入顯色底物TMB，在酶催化下產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色。顏色深度與樣品中TAT濃度呈正相關(guān)，通過(guò)酶標(biāo)儀讀取450nm波長(zhǎng)吸光度值，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算待測(cè)樣本中TAT的精確濃度[1]。
試劑盒在止血研究中的應(yīng)用
在探究白及不同極性提取部位對(duì)小鼠止血作用的研究中，成功應(yīng)用小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒檢測(cè)了不同給藥組小鼠血漿中的TAT含量。研究設(shè)計(jì)了全身肝素化小鼠模型，分別給予白及乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和水提取物干預(yù)，連續(xù)給藥5-7天后采集腹主動(dòng)脈血，分離血漿，嚴(yán)格按照小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，測(cè)定各組TAT水平[1]。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖4A、圖4C），云南白藥組和白及水提取物組均能顯著提高雌雄小鼠血漿中TAT含量。將雌雄小鼠數(shù)據(jù)合并統(tǒng)計(jì)分析后發(fā)現(xiàn)，云南白藥干預(yù)可使小鼠血漿TAT含量提高20.36%，白及水提取物干預(yù)提高11.32%（圖4B）。相比之下，乙醇提取物對(duì)TAT含量無(wú)顯著影響，而乙酸乙酯提取物反而減少了小鼠血漿中TAT含量[1]。
這一結(jié)果表明，小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒能夠靈敏地檢測(cè)到不同藥物干預(yù)后TAT水平的微小變化，證實(shí)了白及水提物的止血作用與其促進(jìn)凝血酶生成、增強(qiáng)TAT形成密切相關(guān)。該研究還同步測(cè)定了纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）含量，進(jìn)一步揭示了白及水提物通過(guò)促進(jìn)血小板聚集和凝血雙重機(jī)制發(fā)揮止血作用[1]。
試劑盒在膿毒癥凝血研究中的應(yīng)用
膿毒癥常伴有凝血功能障礙，TAT作為凝血激活的敏感指標(biāo)，在膿毒癥病情評(píng)估中具有重要意義。實(shí)驗(yàn)中采用盲腸結(jié)扎穿孔法（CLP）建立膿毒癥幼鼠模型，在不同時(shí)間點(diǎn)（6h、12h、24h）采集心臟血，應(yīng)用ELISA法測(cè)定血清TAT水平。雖然該研究使用了大鼠模型，但其方法論同樣適用于小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒的檢測(cè)體系。
研究結(jié)果表明，膿毒癥組幼鼠TAT值在6h時(shí)點(diǎn)已出現(xiàn)上升并進(jìn)行性增高，于24h達(dá)到高峰；而黃芪注射液干預(yù)組TAT水平在6h同樣增高，但增高程度低于膿毒癥組，12h、24h變化規(guī)律與膿毒癥組相同，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[2]。該研究證實(shí)，黃芪注射液早期干預(yù)可改善膿毒癥幼鼠的凝血功能異常，而小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒正是評(píng)估此類干預(yù)效果的敏感工具。
參考文獻(xiàn)
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