BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(BH3-interacting domain death agonist,Bid)是Bcl-2蛋白家族中一類僅含BH3結(jié)構(gòu)域的促凋亡成員。Bcl-2家族成員依據(jù)結(jié)構(gòu)域組成分為兩類:抗凋亡成員含有完整的四個保守BH結(jié)構(gòu)域,而促凋亡成員及僅含BH3結(jié)構(gòu)域的促凋亡蛋白則缺少BH4結(jié)構(gòu)域。
在凋亡啟動之前,Bid蛋白均勻分布于細胞質(zhì)內(nèi)。當?shù)蛲鲂盘柤せ詈?Bid被caspase-8切割為具有活性的tBid。tBid向線粒體轉(zhuǎn)運,增加線粒體外膜的通透性,同時促進Bax向線粒體膜的插入和多聚體形成。這一系列事件最終導致細胞色素C釋放,激活下游Caspase級聯(lián)反應,啟動細胞凋亡的執(zhí)行階段。正是由于Bid在凋亡信號整合與放大中的核心地位,其在視網(wǎng)膜色素變性、哮喘等多種疾病發(fā)病機制中的作用備受關(guān)注。大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒是專用于大鼠樣本中Bid蛋白定量檢測的科研工具。
檢測原理
大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法(Sandwich ELISA)。其核心原理是:用純化的抗大鼠Bid抗體預包被于微孔板底部,依次加入待測樣本或標準品、生物素化的檢測抗體及酶(如HRP)標記的親和素,形成“固相抗體-抗原-檢測抗體-酶”的免疫復合物。加入底物TMB后,在HRP酶催化下發(fā)生顯色反應,顏色的深淺與樣本中Bid蛋白含量呈正相關(guān),最終在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣本中Bid的濃度。
試劑盒組成
一個標準的大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒通常包含以下組分:預包被抗體的酶標包被板、不同濃度的標準品及標準品稀釋液、樣品稀釋液、酶標試劑、濃縮洗滌液(需按比例稀釋)、顯色劑A液和顯色劑B液、終止液、封板膜、密封袋及產(chǎn)品說明書。
應用案例
視網(wǎng)膜色素變性研究中的應用
采用視網(wǎng)膜色素變性經(jīng)典動物模型RCS(rdy?/?,p?/?)大鼠,研究了枸杞加丹參對視網(wǎng)膜組織中Bcl-2、Bid表達的影響。研究采用免疫組化、Real-time PCR和Western blot三種方法檢測Bcl-2和Bid的表達。
研究結(jié)果顯示,RCS(rdy?/?,p?/?)模型組大鼠視網(wǎng)膜組織中Bcl-2表達下降、Bid表達上升。經(jīng)枸杞加丹參灌胃28天后,杞參組大鼠視網(wǎng)膜Bcl-2 mRNA相對表達量明顯高于模型組,差異有統(tǒng)計學意義，Bid mRNA相對表達量明顯低于模型組,差異有統(tǒng)計學意義。Western blot結(jié)果與PCR結(jié)果一致,杞參組Bcl-2蛋白相對表達量明顯高于模型組,而Bid蛋白相對表達量明顯低于模型組[1]。
雖然該研究主要采用免疫組化和Western blot進行蛋白檢測,但大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒在該類研究中同樣具有應用價值。與Western blot相比,ELISA試劑盒具有操作簡便、通量大、定量準確等優(yōu)勢,尤其適用于大樣本的Bid蛋白篩查。研究者若需對大量視網(wǎng)膜組織樣本進行Bid蛋白的快速定量檢測,ELISA試劑盒是更高效、更經(jīng)濟的選擇。
哮喘研究中的應用
采用免疫組化和實時定量PCR法檢測了哮喘大鼠肺組織中Bid和骨膜蛋白的表達。研究發(fā)現(xiàn)哮喘組肺組織Bid蛋白及Bid mRNA的表達水平均高于對照組。相關(guān)性分析顯示,肺組織Bid mRNA與Bid蛋白表達水平呈正相關(guān),Bid蛋白與骨膜蛋白表達水平亦呈正相關(guān)[2]。
該研究表明Bid在哮喘氣道炎癥中可能具有促炎作用。在類似的大規(guī)模哮喘動物模型研究中,大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒可作為一種便捷、標準化的檢測工具,用于快速篩查大量血清、血漿或肺組織勻漿樣本中Bid蛋白的表達水平,為哮喘發(fā)病機制的深入研究提供有力的數(shù)據(jù)支撐。
參考文獻
[1] 彭俊, 王英, 蔣鵬飛, 等. 枸杞丹參對RCS大鼠視網(wǎng)膜組織中Bcl-2、Bid表達的影響[J]. 世界科學技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2020, 22(4): 1166-1175.
[2] 王恩智, 葉馨楠, 鮑林靈, 等. 哮喘大鼠肺組織Bid和骨膜蛋白檢測的意義[J]. 現(xiàn)代實用醫(yī)學, 2019, 31(8): 1000-1001, 1136.