膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，根據(jù)病理學(xué)分期可分為非肌層浸潤性膀胱癌和肌層浸潤性膀胱癌。以往以手術(shù)為主的綜合療后，患者的預(yù)后并未獲得突破性改善，非肌層浸潤性膀胱癌術(shù)后復(fù)發(fā)率仍達(dá)50%~70%，而肌層浸潤性膀胱癌患者5年內(nèi)死于腫瘤轉(zhuǎn)移的比例至少為50%[1]。因此，在這一背景下，開發(fā)新的抗腫瘤藥物具有非常重要的意義。
J82人膀胱移行細(xì)胞癌作為經(jīng)典的膀胱癌細(xì)胞模型，被廣泛用于抗腫瘤藥物的篩選與機(jī)制研究中。J82人膀胱移行細(xì)胞癌具有明確的遺傳學(xué)特征，表達(dá)H-ras癌基因，在裸鼠體內(nèi)具有致瘤性，這些特性使其成為研究膀胱癌進(jìn)展和藥物響應(yīng)的理想工具。
丹參酮ⅡA對J82人膀胱移行細(xì)胞癌的作用及機(jī)制
丹參酮ⅡA是從唇形科植物丹參中提取的脂溶性菲醌類化合物，具有良好的抗腫瘤活性。研究中以不同濃度的丹參酮ⅡA處理J82人膀胱移行細(xì)胞癌48小時，發(fā)現(xiàn)該藥物能夠顯著抑制J82人膀胱移行細(xì)胞癌的活性，且呈濃度依賴性，半數(shù)抑制濃度（IC50）為4.16 μmol/L[1]。
在細(xì)胞周期方面，1 μmol/L和3 μmol/L丹參酮ⅡA處理組的G1期細(xì)胞百分比均高于對照組，表明丹參酮ⅡA可將J82人膀胱移行細(xì)胞癌阻滯于G1/S期[1]。在細(xì)胞凋亡方面，1、3、5 μmol/L組的總凋亡率均高于對照組，呈劑量依賴性[1]。
分子機(jī)制層面，丹參酮ⅡA顯著上調(diào)了J82人膀胱移行細(xì)胞癌中caspase3和caspase9蛋白的表達(dá)，同時下調(diào)了凋亡抑制因子cyclinD1、Bcl-xL和P65蛋白的表達(dá)[1]。另外，caspase8蛋白的表達(dá)不受藥物影響。這一結(jié)果表明，丹參酮ⅡA很可能是通過線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑來誘導(dǎo)J82人膀胱移行細(xì)胞癌凋亡[1]。當(dāng)線粒體損傷時，細(xì)胞色素C釋放并激活caspase9，進(jìn)而啟動級聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。
羅哌卡因?qū)82人膀胱移行細(xì)胞癌的作用及機(jī)制
羅哌卡因是一種長效酰胺類局部麻醉藥，近年來的研究發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤活性。以800 μmol/L羅哌卡因處理J82人膀胱移行細(xì)胞癌24小時，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞活力、增殖率、遷移率和侵襲數(shù)均顯著降低[2]。在細(xì)胞增殖方面，羅哌卡因組的細(xì)胞增殖率顯著降低。在遷移和侵襲方面，羅哌卡因組的遷移率均顯著低于對照組[2]。
上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，羅哌卡因可上調(diào)J82人膀胱移行細(xì)胞癌中上皮性標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)，同時下調(diào)間質(zhì)性標(biāo)志物N-cadherin、Vimentin和FN的表達(dá)，表明羅哌卡因可抑制J82人膀胱移行細(xì)胞癌的EMT進(jìn)程[2]。
在信號通路層面，羅哌卡因顯著降低了J82人膀胱移行細(xì)胞癌中p-JNK的表達(dá)水平[2]。為進(jìn)一步驗證，研究者分別使用JNK通路抑制劑SP600125和激活劑茴香霉素進(jìn)行干預(yù)，抑制劑組細(xì)胞增殖率、遷移率、侵襲數(shù)及p-JNK表達(dá)水平進(jìn)一步降低，而激活劑組則逆轉(zhuǎn)了上述趨勢[2]。這證實羅哌卡因是通過阻斷JNK信號通路的活化來抑制J82人膀胱移行細(xì)胞癌的增殖、遷移、侵襲及EMT進(jìn)程。
銀杏內(nèi)酯B對J82人膀胱移行細(xì)胞癌的作用及機(jī)制
銀杏內(nèi)酯B是從銀杏葉中提取的二萜內(nèi)酯類化合物，具有抗氧化、抗炎及抗腫瘤活性。以不同濃度（5、10、20 μmol/L）的銀杏內(nèi)酯B處理J82人膀胱移行細(xì)胞癌24小時，發(fā)現(xiàn)中、高濃度實驗組和陽性藥物組的細(xì)胞活力、增殖率顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高。其中20 μmol/L高濃度實驗組與陽性藥物組（100 nmol/L紫杉醇）效果相當(dāng)[3]。
在分子水平上，銀杏內(nèi)酯B顯著上調(diào)了J82人膀胱移行細(xì)胞癌中Caspase-3的mRNA和蛋白表達(dá)，同時下調(diào)了CyclinD1的mRNA和蛋白表達(dá)[3]。CyclinD1是細(xì)胞周期進(jìn)程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，可作為膀胱癌的增殖標(biāo)志物，Caspase-3的過表達(dá)則與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。
針對NF-κB信號通路，銀杏內(nèi)酯B顯著降低了J82人膀胱移行細(xì)胞癌中p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白的表達(dá)水平，而對總IκBα和總NF-κB p65蛋白無顯著影響[3]。這提示銀杏內(nèi)酯B抑制了NF-κB通路的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。為進(jìn)一步驗證，研究者分別加入NF-κB通路激活劑Prostratin和抑制劑BAY11-7082，激活劑組逆轉(zhuǎn)了銀杏內(nèi)酯B的促凋亡和抑增殖效應(yīng)，而抑制劑組則增強(qiáng)了這些效應(yīng)[3]。這表明銀杏內(nèi)酯B是通過抑制NF-κB信號通路的活化來抑制J82人膀胱移行細(xì)胞癌增殖并誘導(dǎo)其凋亡。
參考文獻(xiàn)
[1] 戴順, 沈瑞林, 唐晨野, 等. 丹參酮ⅡA對人膀胱癌J82細(xì)胞增殖與凋亡效應(yīng)及作用機(jī)制[J].浙江臨床醫(yī)學(xué),2022, 24(3): 332-335,339.
[2] 楊欣宇, 楊陽, 王立娟. 羅哌卡因抑制膀胱癌J82細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的分子機(jī)制研究[J]. 檢驗醫(yī)學(xué)與臨床, 2024, 21(21): 3195-3200.
[3] 龐華, 智靜濤, 邊建華, 等. 銀杏內(nèi)酯B對膀胱癌J82細(xì)胞增殖、凋亡的機(jī)制研究[J].現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志,2024,16(1):41-48.