琥乙紅霉素(Erythromycin Ethylsuccinate,EES)屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,是紅霉素(Erythromycin,EM)的衍生物，化學(xué)式為C43H75NO16,分子量為862.07。其具有抗菌譜廣,口服吸收好?！粗袊幍洹?2010版)采用抗生素微生物檢定法測其含量。該法雖能真實(shí)地測得抗菌活性的效價(jià),結(jié)果基本可靠,但由于琥乙紅霉素的主要降解產(chǎn)物紅霉素也有生物活性,故抗生素微生物測定法專屬性不強(qiáng),且操作繁瑣,檢驗(yàn)周期長,不適合對產(chǎn)品的快速質(zhì)量控制。因此隨著這類藥物在臨床上廣泛應(yīng)用,關(guān)于其含量測定的方法的報(bào)道也在不斷增多,本文將近年來關(guān)于琥乙紅霉素含量測定的方法綜述如下。
測定研究[1]
1、高效液相色譜法
王愛華等人建立琥乙紅霉素人體內(nèi)活性代謝物紅霉素的HPLC-MS/MS分析方法測定虢乙紅霉素顆粒體內(nèi)活性代謝物。選用克拉霉素為內(nèi)標(biāo),血漿樣品經(jīng)正己烷-二氯甲烷-異丙醇(300:150:15)提取處理,通過檢測活性代謝物紅霉素的濃度來監(jiān)測琥乙紅霉素體內(nèi)行為,色譜條件:Waters C18色譜柱(4.6mmx250mm,5um),甲醇-水(80:20,含0.5%甲酸)為流動(dòng)相,流速0.6mL?min-1,采用HPLC-MS/MS檢測系統(tǒng)(SRM模式),質(zhì)譜采用電噴霧電離源(ESI),紅霉素選擇檢測離子對為m/z734→m/z158,內(nèi)標(biāo)克拉霉素選擇檢測離子對為m/z748-m/z158得到結(jié)果為血漿中紅霉素檢測方法的線性范圍為9.724~2431.0ng?mL-1,最低檢測限可達(dá)9.724ng?ml-1。血漿中紅霉素的平均回收率為77.6%~80.0%;日內(nèi)、日間RSD均小于11%。方法靈敏、準(zhǔn)確、選擇性高,可用于監(jiān)測琥乙紅霉素的體內(nèi)行為。類似的,Gu Y等通過高效液相色譜-電噴霧申聯(lián)質(zhì)譜法(LC-ESI-MS/MS)測定人體血漿中琥乙紅霉素及其體內(nèi)活性代謝物。
2、分光光度法
2.1酸性染料比色法
安彩賢等根據(jù)琥乙紅霉素的水解產(chǎn)物紅霉素與甲基橙形成離子對在氯仿中呈金黃色,且最大吸收波長在420nm的特點(diǎn)，采用酸性染料比色法測定了琥乙紅霉素及其片劑的含量。平均回收率分別為99.4%(RSD = 0.636%,n=2),99.5%(RSD=0.283%,n=2)。用該方法法測定利菌沙片中琥乙紅霉素含量，所得結(jié)果與抗生素微生物檢定接近。
2.2紫外分光光度法
〈中國藥典》(2010年版)二部規(guī)定其溶出度方法中有紫外-可見分光光度法,王曉玲等根據(jù)琥乙紅霉素在酸性條件下水解后的顯色產(chǎn)物在482nm處有最大吸收的特點(diǎn)，利用紫外分光光度法測定琥乙紅霉素膠囊劑中其有效主成分含量,并做了輔料的干擾實(shí)驗(yàn),確定了輔料在482nm波長處不會(huì)干擾琥乙紅霉素制劑的含量測定。琥乙紅霉素濃度在16.65-49.68ug/mL的范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。該法平均回收率為99.3%(RSD =0.7%,n=5);最后將樣品含量測定結(jié)果與抗生素微生物檢定法進(jìn)行比較,，經(jīng)t檢驗(yàn)，無顯著差異(P>0.05)。
2.3荷移反應(yīng)光度法
紅霉素琥珀酸乙酯與茜素磺酸鈉,氯冉酸,百里酚藍(lán),醌茜素,水楊基熒光酮,紫色素,茜素紅龍膽紫等均易發(fā)生荷移反應(yīng)。李華佩等利用琥乙紅霉素與茜素磺酸鈉在乙醇-水介質(zhì)中發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng),建立了一種簡單、快速的荷移分光光度法測定琥乙紅霉素的含量，并探討了該反應(yīng)的機(jī)理及荷移絡(luò)合物的組成等。實(shí)驗(yàn)得出琥乙紅霉素濃度在10~100mg?mL-1范圍內(nèi)服從比耳定律，多次測量其回收率均大于98%。李華侃和其他人用此法測琥乙紅霉素的含量得到的結(jié)果與藥典方法進(jìn)行比較，結(jié)果也基本吻合。
3、電化學(xué)法
3.1電位分析法
姚秉華等以PVC為支持載體,四苯硼鈉-EES為電活性物質(zhì)研制了性能良好的琥乙紅霉素PVC膜離子選擇性電極。并利用該電極測定利君沙有效成分,并將測定結(jié)果與電位滴定法、抗生素微生物檢定法比較基本吻合。該電極制作方法簡便,響應(yīng)快,選擇性和穩(wěn)定性較好,可用于琥乙紅霉素的快速測定。任艷艷等以碳糊電極為工作電極,采用循環(huán)伏安法和示差脈沖伏安法研究了琥乙紅霉素在電極上的電化學(xué)行為,建立了一種測定EES的電化學(xué)新方法,該法具有較高的選擇性和靈敏度,可用于藥劑中EES含量的測定。
3.2流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法
王建國,汪敬武研究發(fā)現(xiàn)堿性條件下,琥乙紅霉素對魯米諾-鐵氰化鉀化學(xué)發(fā)光作用有抑制作用,且其抑制作用與琥乙紅霉素濃度在一定范圍內(nèi)成正比。從而結(jié)合流動(dòng)注射技術(shù)建立了測定虢乙紅霉索的方法,同時(shí)討論了有關(guān)物質(zhì)對該法的干擾。利用該法得到光強(qiáng)差和琥乙紅霉索濃度作工作曲線,琥乙紅霉索測定線性范圍為0.5-125mg?L-1,計(jì)算出檢出限為0.16mg?L-1,平均回收率為99.3%(RSD=1.8%,n=3)。用該法測定琥乙紅毎素片劑的含量,并與色譜法對照,結(jié)果基本吻合。
4、差示旋光測定法
胡德放等建立差示旋光測定法通過測定差示旋光度差來測定琥乙紅霉素的含量。該法操作簡便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,平均回收率為99.7%(RSD=0.6%,n=4)用該法測定琥乙紅霉素片的含量,并做了賦形劑的干擾實(shí)驗(yàn),排除了其對測定結(jié)果的影響,測定結(jié)果與抗生素微生物檢定法比較，結(jié)果滿意。此法準(zhǔn)確、可靠,適合于對琥乙紅霉紊含量的快速分析。
5、比濁法
魏立平,張潤婕建立濁度法測定虢乙紅霉素片效價(jià)的方法。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法,以金黃色葡萄球菌為實(shí)驗(yàn)菌,加菌量0.3%(V/V),37℃培養(yǎng)3~4h測定,得標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度的對數(shù)值和吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線,按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算供試品的效價(jià)值。所得結(jié)果表明抗生素濃度在0.40~0.97ug?mL-1的范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系,標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定琥乙紅霉素片效價(jià)的平均回收率為99.9%,RSD=1.4%(n=9)。濁度法靈敏、快速,可作為測定琥乙紅霉素片效價(jià)的方法。將比濁法與管碟法測定結(jié)果做比較,發(fā)現(xiàn)兩種方法測得的效價(jià)結(jié)果基本一致,但比濁法的可信限率明顯低于管碟法。
參考文獻(xiàn)
[1] 謝夢,葉莉,陳蓮惠. 琥乙紅霉素測定方法研究進(jìn)展[J]. 山東化工,2014,43(6):54-57. DOI:10.3969/j.issn.1008-021X.2014.06.019.