簡(jiǎn)介

偏磷酸，常溫下為無(wú)色玻璃狀固體物質(zhì)，易吸潮，可溶于水并逐步水解生成正磷酸；它既可作為淬滅劑終止環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶催化的酶促反應(yīng)，也可作為磷酸化試劑，對(duì)蔗糖硬脂酸酯進(jìn)行磷酸化改性，制備磷酸化蔗糖硬脂酸酯SE-P。

偏磷酸的性狀

用途

偏磷酸用作淬滅劑終止CGTase酶促反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)物2-O-α-吡喃葡萄糖基-L-抗壞血酸的高效取樣分析。例如：將可溶性或固定化CGTase樣品（280個(gè)單位）在40°C下與4%（w/v）β-CD、4%（w/vAANa）和0.2%（w/v硫脲在總體積為20ml的含10mM CaCl2的10mM醋酸鹽緩沖液（pH 6.0）中孵育。在黑暗中連續(xù)搖晃24小時(shí)后，取200μl等分試樣。將混合物與800μl 1.06%偏磷酸混合以終止反應(yīng)。通過(guò)離心（1380g）10分鐘收集固定化酶。通過(guò)HPLC分析反應(yīng)混合物中2-O-α-吡喃葡萄糖基-L-抗壞血酸的量。分離固定化酶。用含有10mM CaCl2的50mM醋酸鹽緩沖液（pH 6.0）徹底清洗固定化酶。純化得到產(chǎn)物[1]。

偏磷酸還可作為磷酸化試劑，可與蔗糖硬脂酸酯（SE）經(jīng)高溫反應(yīng)實(shí)現(xiàn)羥基磷酸化，用于制備磷酸化蔗糖硬脂酸酯SE-P。例如：在60°C下將SE（12.1 g）分散在200 mL蒸餾水中。向混合物中加入偏磷酸和MPA溶液（40.1 g/100 mL，用5M NaOH調(diào)節(jié)pH至5.5）（SE/MPA）1:10，摩爾比）。用0.1M氫氧化鈉將pH值重新調(diào)整至5.5。將反應(yīng)混合物凍干。將反應(yīng)混合物在110°C下加熱20小時(shí)以磷酸化。在4°C下以18000 rpm離心30分鐘，用200 mL冷凍水洗滌反應(yīng)產(chǎn)物，以消除未反應(yīng)的MPA。將所得殘留物凍干。在攪拌下將凍干樣品溶解在200 mL氯仿/甲醇（8:2，v/v）中30分鐘，以消除殘留的MPA。過(guò)濾后，在氮?dú)饬飨抡舭l(fā)濾液以回收粗SE-P。使用Iatrobeads RS-8060柱（22內(nèi)徑x 200毫米）進(jìn)行硅膠色譜分析。將粗SE-P加入已用氯仿/甲醇（8:2，v/v）平衡的柱中。蔗糖多硬脂酸酯后，用400mL相同溶劑洗脫除去二酯。用80mL甲醇洗脫SE-P和蔗糖單酯。減壓蒸發(fā)洗脫液。用蒸餾水對(duì)混合物進(jìn)行透析。將混合物凍干得到產(chǎn)物[2]。

參考文獻(xiàn)

[1] Prousoontorn, Manchumas Hengsakul; et al. Production of 2-O-α-glucopyranosyl L-ascorbic acid from ascorbic acid and β-cyclodextrin using immobilized cyclodextrin glycosyltransferase. Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry (2007), 57(1-4), 39-46.

[2] Yamagishi, Yukako; et al. Improvement of the functional properties of sucrose stearate by phosphorylation. Journal of Agricultural and Food Chemistry (2004), 52(26), 8039-8045.