背景[1-6]
小鼠食管上皮細(xì)胞提取物是從小鼠食管上皮細(xì)胞提取的，小鼠食管上皮細(xì)胞從正常小鼠食管上皮組織制備，可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
食管在氣管后方下降，經(jīng)膈的食管裂孔入腹腔，食管橫斷面，顯示管壁肌層及微細(xì)結(jié)構(gòu)，食管、膈、胃(上部)的冠狀切面，示膈食管韌帶將食管連于膈，此韌帶使得食管隨吞咽和呼吸而運動，但限制食管向上的過度移動食管有內(nèi)環(huán)、外縱兩層肌肉。上1/3的外層由骨骼肌組成，下1/3由平滑肌組成，中1/3由骨骼肌和平滑肌混合組成。由于食管肌肉的蠕動，食物可快速地經(jīng)過食管。食管通過膈食管韌帶附著于膈的食管裂孔的邊緣處。
膈食管韌帶是膈下筋膜的延續(xù)，該韌帶使膈和食管在呼吸和吞咽時能獨立運動。食管腹段短，呈管狀，長約1.25cm，經(jīng)右膈腳的食管裂孔續(xù)于胃。食管右緣續(xù)于胃小彎，而其左緣通過心切跡與胃底相隔。食管與胃的連接部位于通過劍突末端平面第11胸椎左側(cè)。外科醫(yī)生及內(nèi)窺鏡專家常常將Z線(即食管黏膜移行為胃黏膜處的Z形線)作為食管和胃的分界。在此處，膈肌形成食管裂孔，像食管括約肌一樣收縮和舒張。放射性研究顯示食物在此處間歇性停留，而且此括約肌可以防止胃內(nèi)容物反流入食管。
應(yīng)用[7][8]
小鼠食管上皮細(xì)胞提取物可用于大鼠食管癌變及其化學(xué)預(yù)防研究：
食管癌占全世界范圍內(nèi)癌癥死亡率的第六位,在我國位于癌癥死亡率的第四位。該動物模型對研究食管癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制及化學(xué)預(yù)防有著重要意義。對于上皮來源實體瘤的研究如實體瘤內(nèi)部不同細(xì)胞體外克隆形成能力的差異,使得人們對腫瘤異質(zhì)性有了更深入的認(rèn)識。腫瘤干細(xì)胞理論的提出為解釋腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性提供了一定的理論依據(jù)。
首先構(gòu)建了兩種NMBzA給藥途徑誘導(dǎo)的大鼠食管癌動物模型并優(yōu)化動物模型,得到了從增生、不典型增生到癌階段的動態(tài)病理標(biāo)本。免疫組化染色分析了目前被證實的大鼠食管干細(xì)胞標(biāo)志物及人食管鱗癌干細(xì)胞標(biāo)志物等在大鼠食管癌發(fā)生發(fā)展過程中的動態(tài)變化情況。
其次,我們利用NMBzA皮下給藥模型進(jìn)行了二甲雙胍預(yù)防食管鱗癌發(fā)生的動物模型研究,證實了二甲雙狐能夠有效抑制NMBzA誘導(dǎo)的大鼠食管癌及其癌前病變的發(fā)生與發(fā)展,并揭示了AMPK/mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是二甲雙胍抑制食管癌發(fā)生的主要作用靶點。
最后,通過體外細(xì)胞實驗進(jìn)一步證實二甲雙胍可以抑制食管上皮永生化細(xì)胞與食管癌細(xì)胞的增殖能力,使上述細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生,上述現(xiàn)象與二甲雙胍抑制食管癌細(xì)胞Bcl-2及cyclinD1的表達(dá)相關(guān)。此外,食管癌細(xì)胞的遷移運動能力與平板克隆形成能力及成球性生長能力也顯著受到抑制,這與二甲雙胍影響食管癌細(xì)胞中AMPK/mTOR、PI3K/Akt及Stat3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和降低干性相關(guān)基因表達(dá)相關(guān)。
綜上所述,我們的研究成功構(gòu)建了NMBzA誘導(dǎo)的大鼠食管癌動物模型,為大鼠食管癌發(fā)生發(fā)展過程中各重要基因的突變與表達(dá)量的改變以及研究食管鱗癌干細(xì)胞的起源問題提供了標(biāo)本來源。通過體內(nèi)、體外實驗證實了二甲雙胍預(yù)防食管癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,為二甲雙胍在臨床中預(yù)防及治療食管癌癌前病變提供一定的理論基礎(chǔ)。
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