RNA克隆是將載體用限制性內(nèi)切酶雙酶切得到線性化的載體；需要同時(shí)合成兩種序列不完全相同的寡核苷酸片段，這兩種寡核苷酸片段在退火后形成雙鏈DNA片段；載體和雙鏈DNA片段通過(guò)T4 DNA連接酶連接，得到環(huán)型的DNA分子。最后將連接得到的DNA分子轉(zhuǎn)化細(xì)菌，通過(guò)篩選得到正確的基因克隆。體外轉(zhuǎn)錄合成ShRNAs法，是按照生命合成RNA過(guò)程的原理，用轉(zhuǎn)錄方法來(lái)合成ShRNAs，其ShRNA最接近生命自然狀態(tài)中的dsRNA，RNA干擾效果也最好。較化學(xué)合成而言，體外轉(zhuǎn)錄制備ShRNA的優(yōu)勢(shì)在于成本低、質(zhì)量高、毒性小和穩(wěn)定性均較好。