檢驗原理
本試劑盒采用SYBR Green染料法實時熒光定量PCR技術(shù)，針對鯉皰疹病毒3型（CyHV-3）Sph基因的高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物。在PCR擴(kuò)增過程中，SYBR Green染料與雙鏈DNA結(jié)合釋放熒光信號，通過儀器實時監(jiān)測熒光強(qiáng)度變化，實現(xiàn)對病毒核酸的定性和定量分析。
產(chǎn)品名稱
鯉皰疹病毒3型染料法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱
Cyprinid Herpesvirus 3 (CyHV-3) Dye-based qPCR Kit
產(chǎn)品規(guī)格
50T
產(chǎn)品分類
熒光定量PCR
檢測類型
PCR檢測
產(chǎn)品貨號
PR3964
主要組分
PCR MagicMix 3.0（含Taq酶、dNTPs、緩沖液及SYBR Green染料）
超純水（無核酸酶）
CyHV-3 Sph基因特異性引物混合液
陽性對照（1×10^8 拷貝/μL，需單獨存放）
核酸釋放劑（可選用于樣本前處理）
使用手冊
操作步驟
反應(yīng)體系配制（建議冰上操作）：
每40μL反應(yīng)體系含：
PCR MagicMix 3.0：20μL
引物混合液：2μL
待測DNA模板：5μL
超純水：補(bǔ)足至40μL
陽性對照需單獨設(shè)置反應(yīng)管。
擴(kuò)增程序（以常見儀器為例）：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘
循環(huán)階段（40個循環(huán)）：
變性：95℃ 15秒
退火/延伸：60℃ 30秒（此階段采集熒光信號）
熔解曲線分析（可選）：60℃~95℃逐步升溫，驗證擴(kuò)增特異性。
結(jié)果判讀：
陽性：Ct值≤35，且熔解曲線呈現(xiàn)單一峰值；
可疑：35＜Ct值＜40，建議重復(fù)檢測；
陰性：無擴(kuò)增曲線或Ct值≥40。
注意事項
試劑需-20℃保存，避免反復(fù)凍融；
陽性對照需與其他組分分開放置，防止污染；
操作時需穿戴防護(hù)裝備，避免核酸交叉污染；
本產(chǎn)品僅限科研使用，不適用于臨床診斷。
性能參數(shù)
靈敏度：可檢測低至10拷貝/μL的CyHV-3核酸；
特異性：與常見水生動物病原體無交叉反應(yīng)；
保存期限：12個月（-20℃避光）。
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