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胎球蛋白的制備

2020/10/21 8:45:43

背景及概述[1]

胎球蛋白(fetuin,α2-HS糖蛋白,分子量45kda--65 kda)是一種由肝臟合成的糖蛋白,廣泛存在于哺乳動物(包括人、牛、鼠等)胚胎期體內(nèi),以血漿、腦脊液、肝臟及骨骼中含量為高。牛的胎球蛋白(fetuin)含近乎 30%的糖,含有2個N-末端和一個相對較小的C-末端區(qū)域。

盡管胎球蛋白(fetuin)被發(fā)現(xiàn)于1944年,但其功能和用途尚不十分清楚。文獻(xiàn)報道,胎球蛋白(fetuin)能夠增加細(xì)胞生長率以及提高蛋白質(zhì)的表達(dá)。由于其在細(xì)胞培養(yǎng)中抑制蛋白水解酶的活性,故能加強(qiáng)細(xì)胞間的接 觸和細(xì)胞的延伸。目前,胎球蛋白(fetuin)主要用于細(xì)胞培養(yǎng),特別是在無血清細(xì)胞培養(yǎng)中能增加細(xì)胞生長和復(fù)制。

應(yīng)用[2] [3]

CN201310165956公開了一種以含唾液酸胎球蛋白磁珠富集流感病毒的方法,包括以下步驟:(1)用渦旋儀將羧基化磁性微球進(jìn)行震蕩分散;(2)用1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS),將羧基化磁性微球的羧基活化,得到具有羧基活性的磁性微球;(3)將溶解的胎球蛋白直接加入到(2)所活化的磁性微球中進(jìn)行共價結(jié)合;(4)將(3)中結(jié)合上胎球蛋白的磁性微球直接加入到待檢液體中進(jìn)行病毒的富集。本發(fā)明方法將建立好的胎球蛋白磁性微球直接加入到待檢液體中進(jìn)行病毒富集,富集后即可檢測,不需要經(jīng)過離心、沉淀等中間環(huán)節(jié),節(jié)省時間,且不需要特殊儀器,具有快速敏感、抗干擾能力強(qiáng)、方便經(jīng)濟(jì)、簡單實用,不污染環(huán)境等優(yōu)點。

CN201710027773報道了一種毛囊干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基及其制備方法,該培養(yǎng)基由低糖DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加成份組成,所述添加成份及其含量如下:血清替代物5-10% (v/v)、胎球蛋白0.1-5mg/ml、維生素C35-80ng/ml、L-谷氨酰胺1.5-5mmol/ml、表皮生長因子1-20ng/ml、葡萄糖5-15μM、2-巰基乙醇25-120μM、青鏈霉素雙抗溶液2-15μM。采用該無血清培養(yǎng)基體外培養(yǎng)時,毛囊干細(xì)胞大量快速增長,且生長穩(wěn)定,純度高,且該無血清培養(yǎng)基的制備方法簡單,保留了培養(yǎng)基中各組分的有效活性。

制備[1]

胎球蛋白制劑的制備方法有多種,下面是其中一種(以胎牛血清做原料為例):

胎牛血清加入2-3倍體積的0.03-0.05M醋酸鋅,用28.5%-35%乙醇調(diào)節(jié) pH值至6-6.8,-5℃下放置12-16小時,離心后棄去沉淀,收集上清液,加 入1.0-2.0M醋酸鋇及95%乙醇而獲得終濃度為0.02或0.04M鋇離子; 25%-45%乙醇,調(diào)節(jié)pH值到6或6.7放置2小時,離心,棄去沉淀,收集上 清液,加入95%乙醇使?jié)舛葹?0%或50%乙醇放置12-16小時,離心,沉淀(得 到胎球蛋白,F(xiàn)ETUIN)。

按照常規(guī)的藥物制劑方法,可將胎球蛋白(fetuin)制備成臨床上適用 的藥物劑型。例如,粉針劑,水針劑,輸液劑,皮下給藥制劑及其它釋藥系統(tǒng)。胎牛血清加入3倍體積的0.05M醋酸鋅,35%7醇調(diào)節(jié)pH值至6下放置 12-16小時,離心后棄去沉淀,收集上清液,加入1.5M醋酸鋇及95%乙醇而 獲得終濃度為0.04M鋇離子(Ba++);30%乙醇,調(diào)節(jié)pH值到6放置2小時, 離心,棄去沉淀,收集上清液,加入95%7醇使?jié)舛葹?0%乙醇放置12-16 小時,離心,沉淀(胎球蛋白,F(xiàn)ETUIN),棄去上清液,用3%甘露醇注射用 水溶解得到胎球蛋白溶液;反復(fù)無菌過濾,分裝,冷凍干燥,即得胎球蛋白 (FETUIN)粉針劑。

主要參考資料

[1]CN201310165956.2一種以含唾液酸胎球蛋白磁珠富集流感病毒的方法

[2] [中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)] CN200410091034.2 一種糖蛋白在制藥中的應(yīng)用

[3]CN201710027773.2一種毛囊干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基及其制備方法

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