背景[1-3]
ATP酶2C2抗體是可以特異性結合ATP酶2C2的一類多克隆抗體。ATP酶2C2抗體是以源自人SPCA2的KLH共軛合成肽免疫無菌動物后在其血清中純化制得的IgG。P型Ca2+轉運ATP酶家族由三個亞科組成：肌漿膜（內質網）Ca2+ATPase（SERCA），質膜Ca2+ATPase（PMCA）和分泌途徑Ca2+ATPase（SPCA）。SPCA1蛋白（由ATP2C1基因編碼）是Ca2+/Mn2+-轉運ATPase。它定位于高爾基體，并且與ATP酶2C2抗體SERCA2一起負責高爾基體腔中的離子環(huán)境。SPCA2（由ATP2C2基因編碼）也位于高爾基體，并且比SPCA1具有更高的酶轉化率，同時對胞質Ca2+具有高親和力。人SPCA2酶ATP酶2C2抗體的酶學性質并將其組織表達限制在胃腸道和呼吸道，前列腺，甲狀腺，唾液和乳腺，原則上可以定義在分泌細胞中具有特定生理作用的Ca2+-ATPase泵。
應用[4][5]
用于β-catenin通過鈉/鉀ATP酶的α2亞單位調節(jié)骨骼肌細胞的靜息膜電位研究
β-catenin胞漿蛋白是Wnt經典信號通路的一個重要下游分子,它在各系統(tǒng)組織中作用廣泛β-catenin已經被證實在神經肌肉接頭(neuromuscular junction,NMJ)形成中起著重要作用。而骨骼肌而并非突觸前神經元的B-catenin在NMJ中作用尤為重要。獲取HSA-β-cat-/-敲除小鼠,檢測其和同窩對照小鼠骨骼肌細胞的電生理差異,并結合體外用靶向β-catenin的小片段干擾RNAs(β-catenin siRNAs)轉染培養(yǎng)的小鼠成肌纖維細胞(C2C12)的方法進一步證實這種差異,從而來探討骨骼肌β-catenin缺失后小鼠致死的可能原因和引起RMP去極化的可能機制,并進一步為β-catenin在NMJ發(fā)育中的作用研究提供補充證據(jù)和新的思路。
方法：
1.實驗分組：1)HSA-B-cat-/-敲除PO小鼠組和同窩β-catloxp/loxpP0小鼠對照組,各4-6只；2)分別轉染了β-catenin siRNA259sβ-catenin siRNA577、β-catenin siRNA1312的三組C2C12細胞作為實驗組和轉染了scrambled siRNA的C2C12細胞作為對照組；
2.實驗方法：雜交小鼠獲取敲除組和實驗組小鼠,分別對各組小鼠膈肌、腓腸肌、趾長伸肌進行細胞內記錄；轉染C2C12細胞,對各組進行全細胞記錄；Western blot法檢測各組轉染后C2C12細胞和各組小鼠肌肉中鈉/鉀ATP酶(Na,K-ATPase)a2亞單位(a2NKA)、Na,K-ATPase的a1亞單位(alNKA)、Kv3.4蛋白的表達；實時熒光定量逆轉錄-PCR檢測兩組小鼠肌肉中a2NKAmRNA的水平。
參考文獻
[1]Activation of W nt5a‐R or2 signaling associated with epithelial‐to‐mesenchymal transition of tubular epithelial cells during renal fibrosis[J].Xin Li,Kaoru Yamagata,Michiru Nishita,Mitsuharu Endo,Nur Arfian,Yoshiyuki Rikitake,Noriaki Emoto,Ken‐ichi Hirata,Yoshiya Tanaka,Yasuhiro Minami.Genes Cells.2013(7)
[2]β-Catenin gain of function in muscles impairs neuromuscular junction formation[J].Haitao Wu,Yisheng Lu,Arnab Barik,Anish Joseph,Makoto Mark Taketo,Wen-Cheng Xiong,Lin Mei.Development.2012(13)
[3]Wnt/β-Catenin Signaling Regulates Telomerase in Stem Cells and Cancer Cells[J].Katrin Hoffmeyer,Angelo Raggioli,Stefan Rudloff,Roman Anton,Andreas Hierholzer,Ignacio Del Valle,Kerstin Hein,Riana Vogt,Rolf Kemler.Science.2012(6088)
[4]β-Catenin stabilization in skeletal muscles,but not in motor neurons,leads to aberrant motor innervation of the muscle during neuromuscular development in mice[J].Yun Liu,Yoshie Sugiura,Fenfen Wu,Wentao Mi,Makoto M.Taketo,Steve Cannon,Thomas Carroll,Weichun Lin.Developmental Biology.2012(2)
[5]趙聰穎.β-catenin通過鈉/鉀ATP酶的α2亞單位調節(jié)骨骼肌細胞的靜息膜電位[D].浙江大學,2014.