背景[1-3]
Mouse Anti-Human IgE Antibody是一類可以特異性結(jié)合Human IgE的多克隆抗體，主要用于檢測Human IgE的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實驗。
正常情況下血清IgE僅在ng/ml水平，用常規(guī)測定IgG或IgM的凝膠擴(kuò)散法檢測不出IgE，必須用高度敏感的放射免疫測定法及酶聯(lián)免疫測定法進(jìn)行檢測。
1．放射免疫吸附劑試驗（radioimmunosorbenttest，IRST）是將抗IgE吸附到固相載體上用以檢測血清IgE的方法，故又稱固相放射免疫測定（SPRIA）；臨床常用雙抗體夾心法，多以濾紙為載體。將抗IgE抗體偶聯(lián)到經(jīng)溴化氟活化的濾紙上，使其與待檢血清及IgE參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行反應(yīng)；洗滌后加入125I標(biāo)記的抗人IgE，再經(jīng)洗滌后測定濾紙片的放射活性，其測定值與標(biāo)本中的IgE含量呈正相關(guān)。
2．酶聯(lián)免疫測定法測定血清IgE時也常用雙抗體夾心ELISA法，操作方便，敏感性也很高，在臨床上經(jīng)常應(yīng)用。
3．間接血凝試驗用抗IgE至敏紅細(xì)胞，將標(biāo)本血清做系列稀釋后與致敏紅細(xì)胞反應(yīng)。此法更加簡便易行，便于普及，但敏感性比上兩法稍低。
IgE和IgG4（以下只用IgE代表）是介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的抗體，因此檢測血清總IgE和特異性IgE對Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的診斷和過敏原的確定很有價值。IgE升高相關(guān)的常見疾病有：過敏性哮喘、季節(jié)性過敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、藥物性間質(zhì)性肺炎、支氣管肺曲菌病、麻風(fēng)、類天皰瘡及某些寄生蟲感染等。
應(yīng)用[4][5]
用于日本血吸蟲童蟲細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠抗攻擊感染的免疫學(xué)研究
為了進(jìn)一步確認(rèn)其免疫效果；比較童蟲細(xì)胞和成蟲細(xì)胞，死細(xì)胞與活細(xì)胞誘導(dǎo)宿主所產(chǎn)生的保護(hù)性效果差異及其免疫應(yīng)答特點；探索的免疫次數(shù)。
方法:S．j尾蚴感染小鼠獲得蟲體。胰酶消化法制備蟲源性細(xì)胞。臺盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞活率。活細(xì)胞經(jīng)-20℃凍融后定為死細(xì)胞。PCR擴(kuò)增鑒定血吸蟲蟲源性細(xì)胞的種屬特異性并檢測細(xì)胞的純度。
在實驗一中，53只昆明小鼠被分成4組，即對照組10只、18天童蟲活細(xì)胞(LLC)免疫組18只、18天童蟲死細(xì)胞(DLC)免疫組13只和42天成蟲死細(xì)胞(DAC)免疫組11只。每兩周分別用各免疫原對小鼠作皮下注射，共4次。于末次免疫后1周用30±1 S．j尾蚴對小鼠進(jìn)行攻擊感染。感染后第42天剖殺沖蟲，觀察結(jié)果。
根據(jù)實驗1結(jié)果，LLC是誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生保護(hù)性效果的免疫原，因此，在實驗二中選擇了LLC對昆明小鼠作不同次數(shù)免疫，比較所誘導(dǎo)產(chǎn)生的保護(hù)性免疫，探索免疫次數(shù)。28只小鼠隨機(jī)分為4組：免疫1次組(V1)、2次組(V2)和3次組(V3)及對照組(Co)。
于末次免疫后第2周用30±1 S．j尾蚴進(jìn)行攻擊感染。感染后第45天解剖小鼠沖蟲。保護(hù)性效果的觀察指標(biāo)包括：計數(shù)蟲荷及卵荷；測量蟲體長度和肝組織內(nèi)蟲卵肉芽腫面積；對蟲卵肉芽腫進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。
免疫學(xué)觀察指標(biāo)包括：ELISA檢測免疫前后不同時點鼠血清中特異性總抗體(IgG+A+M)和IgG亞類抗體水平的動態(tài)變化；用SDS-PAGE及Western-blot對蟲體與細(xì)胞的成分差異及免疫特性差異進(jìn)行比較分析。
參考文獻(xiàn)
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[3]Overview:from the horse experimentation by Prof.Akira Fujinami to paramyosin[J].Somei Kojima.Parasitology International.2004(2)
[4]A vaccine against Asian schistosomiasis[J].Donald P McManus,Paul B Bartley.Parasitology International.2004(2)
[5]蔡力汀.日本血吸蟲童蟲細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠抗攻擊感染的免疫學(xué)研究[D].中南大學(xué),2006.