2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷，英文名為2-Nitrophenyl-beta-D-galactopyranoside，常溫常壓下為白色或者淺黃色固體粉末。2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷是一種生物化學試劑，可用作比色和分光光度計底物，用于檢測 β-半乳糖苷酶活性。

生物活性試驗

在生物實驗研究中使用包括2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷和乳糖的兩種底物測量β-半乳糖苷酶活性，通過遵循從2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷釋放的鄰硝基苯酚的量來測量2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷的β-半乳糖苷酶活性。反應混合物由100μL酶溶液和400μL2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷溶液（2.5g/L，在pH6.8的100mM Tris-HCl緩沖液中）組成，在78度下溫育15分鐘后，通過加入等體積的1M碳酸鈉以終止反應。β-半乳糖苷酶對2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷具有高水解能力（100％），對其天然底物乳糖具有中等活性（25.7％）。然而，酶對所有其他生色硝基苯類似物的水解能力非常弱，表明Gal308是具有窄底物特異性的β-半乳糖苷酶。需要說明的是一個活性單位定義為在測定條件下每分鐘產(chǎn)生1μmol鄰硝基苯酚所需的酶量，比活性表示為每毫克蛋白質(zhì)的單位。在含有100μL酶溶液和5％乳糖的相同緩沖液中進行對乳糖活性的測定，并通過煮沸10分鐘終止反應，并使用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶測定試劑盒測定葡萄糖濃度。[1]

合成方法

圖1 2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷的合成方法

在一個干燥的反應燒瓶中，加入2-硝基苯酚，2,3,4,6-四乙酰氧基-alpha-D-吡喃糖溴化物，氫氧化鈉水溶液和四丁基溴化銨，最后加入二氯甲烷作為反應溶劑。所得的反應混合物在40度下攪拌反應若干個小時，通過TLC點板監(jiān)測反應進度。反應結(jié)束后往反應混合物中加入水和二氯甲烷，分離出有機層并用無水硫酸鈉干燥，過濾除去干燥劑并將濾液在真空下濃縮。所得的殘余物通過硅膠柱層析進行分離純化，即可得到目標產(chǎn)物分子。[2]

參考文獻

[1] Zhang X, et al. BMC Microbiol. 2013 Oct 24. doi: 10.1186/1471-2180-13-237.

[2] Du, Yuguo et al Faming Zhuanli Shenqing, 102690304, 26 Sep 2012