背景及概述^[1][2]

氧化槐果堿是從豆根槐屬植物苦參（Sophra　flavescens　Ait）或豆科植物苦豆子（Sophora　subprostrata chrnet　T.Chen）中分離出來(lái)的生物堿，是中草藥的主要有效成分。為白色或類(lèi)白色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭、味苦。具有升高白細(xì)胞數(shù)，加強(qiáng)機(jī)體免疫力，而起抗痢疾桿菌、皮膚真菌、阿米巴原蟲(chóng)、滴蟲(chóng)等感染的作用，尚有利尿、平喘、催眠、抗心律失常等作用。內(nèi)服可治療急性菌痢、扁桃體炎、乳腺炎、盆腔炎、淋巴結(jié)炎、支氣管炎、喘息、心律失常、白細(xì)胞低下等，對(duì)牛皮癬和失眠也可有效。

作用和用途^[2-3]

鎮(zhèn)痛：氧化槐定堿（OSR）能夠通過(guò)上調(diào) GABAA受體的表達(dá)發(fā)揮起鎮(zhèn)痛作用，OSC與氧化槐定堿化學(xué)結(jié)構(gòu)相似，因此推測(cè)GABA受體也是OSC作用的靶蛋白。有研究利用GABA受體的激動(dòng)劑和拮抗劑等相關(guān)工具藥，進(jìn)一步探討OSC鎮(zhèn)痛的作用機(jī)制。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)側(cè)腦室注射GABA（1.6 mg/kg）對(duì)小鼠正常行為不產(chǎn)生影響，也產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用；當(dāng)GABA（1.6 mg/kg）與閾下劑量的OSC（6 mg/kg）合用時(shí)，小鼠痛閾明顯提高了，提示OSC的鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與GABA受體有關(guān)，從而使GABA對(duì)閾下劑量的 OSC產(chǎn)生協(xié)同作用。MUS是GABAA受體的特異性激動(dòng)劑， 作用于GABA相似，MUS（0.1 μg/只）、閾下劑量的OSC （6 mg/kg）均不能產(chǎn)生中樞鎮(zhèn)痛作用，MUS（0.1 μg/只）與OSC（6 mg/kg）合用時(shí)，小鼠表現(xiàn)安靜，痛閾明顯提高，表明OSC的鎮(zhèn)痛作用可能有GABAA受體的參與，OSC 可能是通過(guò)激動(dòng)GABAA受體，產(chǎn)生抑制性突觸后電位，從而發(fā)揮了中樞抑制作用。

經(jīng)典的GABAA受體拮抗劑PTX是疼痛研究中常用的工具藥，實(shí)驗(yàn)證實(shí)側(cè)腦室分別注射PTX （0.2 μg/只）時(shí)不產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用，將PTX（0.2 μg/只）與鎮(zhèn)痛劑量的OSC（80 mg/kg）合用時(shí)，小鼠痛域沒(méi)有被提高，其機(jī)制是PTX抑制了GABAA受體的活性，從而拮抗了OSC 的鎮(zhèn)痛作用，并進(jìn)一步證實(shí)OSC能夠作用與GABAA受體產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。綜上所述，OSC具有明顯的中樞鎮(zhèn)痛作用，其鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與GABAA有關(guān)，然而中樞GABA能神經(jīng)參與OSC鎮(zhèn)痛 作用的詳細(xì)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

氧化槐果堿誘導(dǎo)SW480細(xì)胞凋亡。根據(jù)用藥劑量分組，用MTT法測(cè)定氧化槐果堿對(duì)SW480細(xì)胞增殖的影響，熒光雙染觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)變化，計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞比率；定時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time PCR)檢測(cè)凋亡基因caspase-3和Bcl-2的變化。結(jié)果 顯示OSC對(duì)體外培養(yǎng)的SW480細(xì)胞增殖具有明顯抑制作用；OSC作用后凋亡細(xì)胞比例顯著增加；凋亡基因caspase-3 mRNA表達(dá)上調(diào)而B(niǎo)cl-2 mRNA表達(dá)下調(diào)。結(jié)論OSC可抑制體外培養(yǎng)的SW480細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，其作用機(jī)制與阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。 

制備 ^[1，5-6]　

方法1：一種高純度、高收率氧化槐果堿的制備方法，其具體步驟為：

1）氧化罐加水水浴溫度升至75℃左右，計(jì)量加雙氧水，緩緩加入槐果堿溶化；

2）將溫度降至5862℃恒溫反應(yīng)；

3）氧化液反應(yīng)至無(wú)雙氧水后，用醚類(lèi)物質(zhì)或苯類(lèi)物質(zhì)中的一種萃取未反應(yīng)的槐果堿，直至氧化液中基本無(wú)槐果堿為止；

4）真空減壓濃縮反應(yīng)液，加乙醇溶解，抽濾；

5）濾液經(jīng)過(guò)脫色劑脫色，抽濾，回收；

6）加丙酮攪拌，冷卻結(jié)晶，離心分離得氧化槐果堿粗品；

7）氧化槐果堿粗品重結(jié)晶得氧化槐果堿精品。

方法2：一種氧化槐果堿鹽的制備方法，包括如下步驟：

1)將槐果堿加入所述槐果堿1-4倍質(zhì)量的雙氧水水溶液或過(guò)碳酸鈉水溶液或過(guò)氧化脲水溶液中至少一種，調(diào)pH為2-5，在20℃-50℃，反應(yīng)5-10h，所述雙氧水水溶液體積百分濃度為10-30％，所述過(guò)碳酸鈉水溶液的質(zhì)量百分濃度為30-40％，所述過(guò)氧化脲水溶液的質(zhì)量百分濃度為30-40％；

2)用C1-C2的鹵代烷或苯或甲苯或二甲苯中的一種萃取未反應(yīng)的槐果堿，直至萃取液經(jīng)薄層色譜檢查無(wú)槐果堿為止，調(diào)pH為8.0-8.5；

3)減壓濃縮至原體積的1/15-1/20，加無(wú)水乙醇至溶解，過(guò)濾，減壓濃縮至干，真空干燥至完全固化；

4)用體積比為1∶3-4的無(wú)水乙醇和丙酮的混合溶劑反復(fù)重結(jié)晶，得到白色氧化槐果堿。

5)將1摩爾氧化槐果堿用溶劑溶解，(所加溶劑量是使氧化槐果堿溶解為宜)再加1-1.5 摩爾有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸的溶液，15℃-30℃反應(yīng)1-2h，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干，真空干燥，即制成一種氧化槐果堿鹽。

方法3：一種從狼牙刺花中提取氧化槐果堿的方法，包括以下步驟：

1）預(yù)處理：稱(chēng)取香菇，按照料液比1g：30 mL加入水，40-50℃加熱40-60min，冷卻后，過(guò)濾，香菇回收利用，得到的香菇濾液備用；將狼牙刺花和得到的香菇濾液按照料液比1：8混合，在3-6℃下浸泡2h，每隔20min翻動(dòng)攪拌一次，過(guò)濾，得到預(yù)處理過(guò)的狼牙刺花；

2）提?。簩⒉襟E（1）預(yù)處理過(guò)的狼牙刺花，按照料液比1g：8 mL加入至少含有一種有機(jī)溶劑的溶液，浸泡72h，過(guò)濾后收集濾液和濾渣，濾渣按照料液比1g：8 mL用至少含有一種有機(jī)溶劑的溶液繼續(xù)浸泡48 h，過(guò)濾后收集濾液和濾渣，合并2次得到的濾液，將濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀減壓濃縮得到氧化槐果堿粗提物浸膏；將濾渣按照料液比1g：10 mL加入質(zhì)量濃度為 1%-5%的乙酸溶液，浸泡72h，過(guò)濾后收集濾液和濾渣，濾渣按照料液比1g：10 mL用質(zhì)量濃度為1%-5%的乙酸溶液繼續(xù)浸泡48 h，過(guò)濾后收集濾液，濾液經(jīng)過(guò)真空濃縮得到氧化槐果堿粗提物浸膏；合并2次得到的氧化槐果堿粗提物浸膏，備用；

3）水沉除雜：將步驟（2）最終得到的氧化槐果堿粗提物浸膏中加入3-5倍質(zhì)量的水，用氨水調(diào)節(jié)pH至11，室溫下靜置48 h后過(guò)濾，收集濾液；

4）將步驟（3）得到的濾液經(jīng)過(guò)真空濃縮得到濃縮膏、濃縮膏真空干燥后、采用甲醇和二氯甲烷為洗脫液進(jìn)行硅膠柱分離、加入乙醚進(jìn)行結(jié)晶分離、加入丙酮重結(jié)晶后進(jìn)行干燥，即得到氧化槐果堿純品。

主要參考資料

[1] CN201210259493.1 一種高純度、高收率氧化槐果堿的制備方法

[2] 氧化槐果堿的鎮(zhèn)痛作用 及其對(duì)小鼠中樞GABAA受體的作用

[3] 氧化槐果堿誘導(dǎo)SW480細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究

[4] CN200610015532.8 氧化槐果堿及其鹽類(lèi)的制備方法

[5] CN201710166245.5 一種從狼牙刺花中提取氧化槐果堿的方法