背景及概述[1]
腺苷脫氨酶(ADA)，腺嘌呤核苷酸氨基水解酶；酶編號(hào)：EC3·5·4·4；分子量：35000，100000；人體組織中腺苷脫氨酶有3種，二種單體酶，另一種為酶-糖蛋白結(jié)合體。有多種方法可測(cè)腺苷脫氨酶活性，最簡(jiǎn)單的測(cè)定方法是利用底物腺苷和產(chǎn)物次黃苷在紫外265nm處吸光度有顯著差異的性質(zhì)。另一大類方法是測(cè)定產(chǎn)物氨，目前應(yīng)用最多。在患急性淋巴細(xì)胞白血病、急性病毒性肝炎、慢性活動(dòng)性肝炎及原發(fā)性肝癌時(shí)，血清中腺苷脫氨酶含量升高。患先天性貧血癥時(shí)該酶也升高。結(jié)核性胸、腹水中腺苷脫氨酶活力明顯高于其他病因，故可用于結(jié)核性胸、腹水的診斷，結(jié)核性與癌性胸水的鑒別診斷。腺苷脫氨酶同工酶檢測(cè)，可提高其對(duì)相關(guān)疾病診斷的特異性和靈敏度。
活性測(cè)定[2]
生物組織中的ADA含量微乎其微，直接測(cè)定ADA含量非常困難。因此，臨床上普遍通過測(cè)定ADA所催化的酶促反應(yīng)速率(v)測(cè)定酶活性。ADA可通過不可逆的脫氨作用分別催化腺苷和脫氧腺苷形成肌苷和脫氧肌苷。由于ADA對(duì)腺苷的親和性高，因此，腺苷常為ADA酶促反應(yīng)的底物，可根據(jù)腺苷的消耗速率、產(chǎn)物肌苷或氨的生成率評(píng)估ADA的活性。但生物樣品成分復(fù)雜，在分析其ADA活性時(shí)，腺苷與肌苷還可能參與其他代途徑，如嘌呤核苷酸磷酸化酶(PNP)也廣泛地存在于人體組織中，它可快速將肌苷轉(zhuǎn)化成次黃嘌呤，若單獨(dú)通過肌苷的生成率評(píng)估ADA活性，會(huì)產(chǎn)生較大的偏差。Carlucci等以肌苷與次黃嘌呤的生成量來評(píng)估正常人與SCID患者紅細(xì)胞中的ADA活性。而Paul等僅通過肌苷的生成分析T淋巴瘤細(xì)胞中ADA的活性，由于PNP也存在于T細(xì)胞中，肌苷是否被分解需要驗(yàn)證。因此，對(duì)于臨床樣品中ADA的活性分析，待測(cè)底物與產(chǎn)物是否進(jìn)一步參與其他代謝需首先被考慮。HPLC分析尿中腺苷脫氨酶活性過程如下：
應(yīng)用[3]
1. ADA在肝臟疾病診療中的臨床價(jià)值
血清中ADA主要來源于肝臟，肝內(nèi)ADA主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，肝細(xì)胞受損時(shí)，ADA釋放進(jìn)入血液循環(huán)，引起外周血中ADA升高，故ADA活性是反映肝細(xì)胞活性的敏感指標(biāo)，可作為肝功能檢查的常規(guī)項(xiàng)目之一，與ALT、AST、ALP、GGT等組成肝酶譜能較全面地反映肝病的酶學(xué)改變。肝炎是我國(guó)常見病之一，作為一種高發(fā)性傳播疾病，肝炎已經(jīng)嚴(yán)重威脅我們的身體健康和日常生活，肝炎種類很多，根據(jù)美國(guó)臨床生物化學(xué)學(xué)會(huì)(theAmericansocietyforclinicalbiochemistryNACB)的標(biāo)準(zhǔn)，把肝炎分為急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和肝癌。ADA既能反映急性肝損傷程度與恢復(fù)過程，又有助于探測(cè)急性肝炎的殘留病變和進(jìn)展情況。在慢性肝損傷時(shí)，血清ADA明顯增高，其陽(yáng)性率達(dá)85.6%－91.2%，因此，ADA活性檢測(cè)可作為慢性肝病的篩選指標(biāo)之一；慢性活動(dòng)性肝炎患者的血清ADA活性明顯高于慢性遷延性肝炎，故可用于兩者的鑒別診斷。肝硬化時(shí)血清ADA活性顯著升高，失代償期肝硬化ADA活性高于代償期肝硬化；在肝硬化時(shí)，轉(zhuǎn)氨酶陽(yáng)性率較低，增高幅度也不明顯，而ADA活性的陽(yáng)性率可達(dá)90%左右，增高程度較明顯，因此，ADA可作為肝硬化病情監(jiān)測(cè)的較好的酶學(xué)指標(biāo)，且隨著Child－Pugh分級(jí)，各級(jí)之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。還有報(bào)道認(rèn)為，經(jīng)治療后，ADA水平下降不明顯者預(yù)后差，若ADA持續(xù)高水平，則病情有可能進(jìn)一步惡化。因此，檢測(cè)ADA水平對(duì)判斷肝硬化預(yù)后有一定臨床意義。有報(bào)道認(rèn)為，ADA活性差異與肝纖維化程度呈高度正相關(guān)，隨著肝纖維化程度增加，ADA活性增加，即肝硬化＞慢性活動(dòng)性肝炎＞慢性遷延性肝炎?？傊?，ADA對(duì)肝臟疾病的診斷、鑒別診斷和判斷肝病演變方向以及預(yù)后都具有一定的臨床價(jià)值，對(duì)評(píng)估肝功能狀況可以起到輔助作用。
2. ADA在結(jié)核病診斷中的臨床價(jià)值
血清、胸腹水、腦脊液、支氣管肺泡灌洗液中的ADA活性在結(jié)核性患者中都可升高，胸腔積液ADA用于結(jié)核性胸膜炎的診斷于1978年為Piras等首先報(bào)道，其相關(guān)報(bào)道陸續(xù)出現(xiàn)。黃春合等檢測(cè)60例癌性胸水和90例結(jié)核性胸水，研究中，結(jié)核性胸腔積液中ADA的值明顯高于癌性胸腔積液，對(duì)結(jié)核診斷的敏感性為81.1%，特異性為91.6%，國(guó)內(nèi)外有許多文獻(xiàn)報(bào)道了ADA對(duì)結(jié)核性胸膜炎有較高的臨床診斷意義，且胸腔積液ADA的敏感性顯著優(yōu)于在胸腔積液中查找結(jié)核桿菌、結(jié)核菌素試驗(yàn)和查結(jié)核抗體，具有很高的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值，對(duì)診斷結(jié)核性胸膜炎具有高敏感性及高特異性，可作為診斷的一項(xiàng)客觀指標(biāo)］。張紅梅等研究表明，結(jié)核性腦膜炎患者ADA明顯升高，其陽(yáng)性率94.3%(33/35)，化膿性腦膜炎及病毒性腦膜炎患者ADA基本正常。因此腦脊液ADA活性可作為結(jié)核性腦膜炎早期鑒別的快速簡(jiǎn)便的診斷指標(biāo)。此外，對(duì)腫瘤、結(jié)核產(chǎn)生的胸腹水、聯(lián)合檢測(cè)癌胚抗原(CEA)和ADA，可提高惡性胸腔積液鑒別診斷的水平。
3. ADA在糖尿病診療中的臨床價(jià)值
糖尿病(DM)是一組由于體內(nèi)胰島素絕對(duì)或相對(duì)不足以致高血糖為特征的內(nèi)分泌代謝疾病，目前發(fā)現(xiàn)與遺傳、免疫、環(huán)境等因素密切相關(guān)，糖尿病患者機(jī)體免疫功能與糖尿病診斷、病情演變等之間的聯(lián)系已引起許多學(xué)者的重視。ADA是T淋巴細(xì)胞分化成熟不可缺少的成分，ADA缺乏可導(dǎo)致T細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育障礙，影響機(jī)體免疫功能，因此ADA被認(rèn)為是細(xì)胞免疫的指標(biāo)。Kurtul研究發(fā)現(xiàn)DM患者尤其是2型糖尿病患者血清ADA明顯升高。楊海青等也發(fā)現(xiàn)DM患者血清ADA升高明顯，而糖尿病腎病患者血清ADA的活性升高更明顯，且與尿微量白蛋呈明顯的正相關(guān)，說明血清ADA的活性愈高，DM患者的腎損害的可能性愈大。黃春秀等的研究發(fā)現(xiàn)DM1和DM2組的WBC和ADA水平均升高，但DM2組升高的更多，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，同時(shí)ADA與CD3、CD4和CD4/CD8呈正相關(guān)，提示2型糖尿病患者體內(nèi)持續(xù)高活性的ADA使T－淋巴細(xì)胞不斷處于旺盛的增殖狀態(tài)，可能以CD4+T細(xì)胞增殖為主，使CD4細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子(如IL－2、IFN－γ)增加，從而加快糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。而且2型糖尿病患者血清ADA的動(dòng)態(tài)觀察對(duì)DM2早期腎損傷診斷也有重要參考價(jià)值。
4. ADA在惡性血液病診療中的臨床價(jià)值
腺苷脫氨酶是嘌呤核苷代謝的重要酶，近年研究發(fā)現(xiàn)ADA與惡性血液病，尤其是淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤存在著密切相關(guān)性。對(duì)95例惡性血液病患者進(jìn)行了血漿ADA的動(dòng)態(tài)測(cè)定，發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞白血病(ALL、CLL等)與MM、ML等血漿中ADA活性明顯高于健康對(duì)照組；以急慢性淋巴細(xì)胞白血病最為顯著，而髓系腫瘤中除AML外，APL、MDS及MPD患者血漿ADA水平無明顯升高；AL、MM、ML治療前后血漿ADA活性差異明顯，治療后ADA活性較治療前明顯降低；該研究還發(fā)現(xiàn)部分惡性血液病ADA活性的高低與外周血腫瘤細(xì)胞的數(shù)量密切相關(guān)，推測(cè)外周腫瘤負(fù)荷與ADA活性也呈現(xiàn)一定相關(guān)性；這些結(jié)果充分表明，血清ADA活性檢測(cè)有助于鑒別診斷良性、惡性血液病及輔助判斷病情的變化。
5. ADA在自身免疫性疾病診療中的臨床價(jià)值
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus，SLE)是一種以免疫功能紊亂為特征的自身免疫性疾病，近年來研究發(fā)現(xiàn)T淋巴細(xì)胞的激活程度反映了SLE的活動(dòng)度。研究表明SLE患者血清ADA活性顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.01)；Taysi等研究認(rèn)為其升高的機(jī)理主要是SLE患者血清ADA除了來自活化的T淋巴細(xì)胞外，還主要來自于單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)活化產(chǎn)生的ADA同功酶的增加所致。周玉貴等的研究結(jié)果還顯示SLE患者血清ADA活性在SLE病情輕重程度有著顯著的差異，且血清ADA活性升高與SLEDAI積分存在高度相關(guān)性，表明血清ADA的變化與病情的嚴(yán)重程度有密切聯(lián)系，對(duì)了解病情的嚴(yán)重程度有一定的臨床價(jià)值。成人Still＇s病(adult－onsetstilldisease，AOSD)是一種系統(tǒng)性自身免疫性疾病，其病因、臨床表現(xiàn)及預(yù)后均存在較高的異質(zhì)性。該病診斷比較困難，目前尚無特異性方法，主要依據(jù)排除法，故誤診率高。研究結(jié)果顯示與對(duì)照組(系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者組和健康對(duì)照組)相比ADA、AOSD組血清ADA活性增高，且血清ADA與LDH呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)，而與WBC無顯著相關(guān)性。證明ADA可能是AOSD潛在的診斷標(biāo)志物。另外，有研究揭示ADA的缺陷會(huì)導(dǎo)致其他嚴(yán)重的免疫缺陷和免疫功能失調(diào)。
6. ADA的其他臨床價(jià)值
傷寒與副傷寒桿菌主要侵犯回腸末端和集合淋巴小結(jié)并在網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)繁殖，致使這些細(xì)胞變性壞死，組織中ADA釋放入血，從而引起血清ADA活性增高。研究表明ADA在傷寒與副傷寒中明顯升高，與健康體檢者及其他發(fā)熱患者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。因此ADA測(cè)定可作為傷寒和副傷寒早期診斷和與其他發(fā)熱患者鑒別診斷的輔助檢查指標(biāo)。
主要參考資料
[1] 內(nèi)科學(xué)·卷
[2] 腺苷脫氨酶活性分析方法研究進(jìn)展
[3] 腺苷脫氨酶的臨床價(jià)值及其應(yīng)用進(jìn)展