在各種動物膽汁中,豬膽汁是最常見且產(chǎn)量最大的,自古代開始就被廣泛應(yīng)用于臨床,如用豬膽汁治療急性黃疸型傳染性肝炎、百日咳、急性腸炎以及胃潰瘍等,均能收到良好的治療效果。豬膽汁中主要含膽汁酸類、膽色素、粘蛋白、脂類及無機物等,膽汁酸則主要包含豬去氧膽酸、豬膽酸、鵝去氧膽酸、3α-羥基-6-氧-5α-膽烷酸以及膽石酸等。其中豬去氧膽酸約占40%,鵝去氧膽酸約占25%。
豬膽酸化學(xué)名為3α,6α,7α-三羥基-5β-膽烷酸,分子式為C24H40O5，分子量408.577,CAS號 547-75-1,為白色針狀結(jié)晶，易溶于乙醇,冰乙酸,幾乎不溶于水,熔點為188~189℃。
豬膽酸具有降低血液膽固醇的作用,可用于治療高血壓及血管粥樣硬化;對革蘭氏陽性菌有較好的抑制作用,特別是對白色葡萄球菌的抑菌作用較好,近年還有報道其對人早幼粒白血病有一定的治療作用。豬膽酸也是人工牛黃及清開靈的主要成分,并可作為原料合成稀缺膽汁酸熊去氧膽酸。
分離方法[1]
(1)取250ml圓底燒瓶,加入豬總膽汁酸粗品10g,無水甲醇50ml,98%濃硫酸0.7ml,于常溫下攪拌反應(yīng)24h,經(jīng)TLC檢測反應(yīng)完畢,無原料殘留后停止反應(yīng),向體系中加入無水NaHCO3固體調(diào)pH至中性,濾去無機鹽,濾餅用甲醇洗滌,合并濾液及洗液,減壓回收甲醇,得棕褐色粘稠物，加水50ml以溶解其中剩余的無機鹽,再以乙醚分次提取有機物(50ml,30ml,20ml),合并有機相,經(jīng)洗滌、干燥、重結(jié)晶得到的白色粉末于紅外燈下干燥至恒重,得到4.5g豬總膽汁酸甲酯;
(2)取100ml圓底燒瓶,依次加入豬去氧膽酸甲酯(4.5g),NaOH固體(1.1g),乙醇30ml,水1m1,于80℃下攪拌回流反應(yīng)20h, TLC監(jiān)測反應(yīng)完畢后,減壓回收溶劑至干,得淡黃色固體,加水30ml,在劇烈攪拌下加10%稀鹽酸調(diào)pH至1~2,析出大量固體,繼續(xù)在常溫下攪拌0.5h,過濾,濾餅經(jīng)洗滌、減壓干燥、重結(jié)晶,得到的白色晶體在紅外燈下干燥至恒重后得到4g豬去氧膽酸。
(3)將上步得到的濾液、洗液以及重結(jié)晶母液合并,減壓回收苯至盡,得到棕色粘稠狀物6.7g。加入乙酸酐54ml,乙酸鈉8g,于110℃下回流反應(yīng)5h， TLC監(jiān)測反應(yīng)完成后，減壓蒸除約2/3體積的乙酸酐,待體系自然降至室溫后加水50ml以溶解其中的無機鹽,用乙醚分次提取有機物(50ml,30ml,20ml),合并有機相,先用1%的NaOH溶液洗滌有機相至接近中性,再洗滌、干燥2h、減壓濃縮，最后以甲醇及苯-石油醚體系重結(jié)晶，干燥后得到白色粉末0.8g豬膽酸甲酯三醋酸酯。
(4)取25ml圓底燒瓶,依次加入豬膽酸甲酯三醋酸酯(0.8g),NaOH固體(0.35g),乙醇10ml,水0.4ml,于80℃下回流反應(yīng)20h, TLC監(jiān)測反應(yīng)完畢后,減壓回收溶劑,得灰白色固體，加水10ml,劇烈攪拌下用10%稀鹽酸調(diào)PH至1.5,析出固體,繼續(xù)于常溫下攪拌0.5h,過濾,濾餅依次用10%稀鹽酸和水各洗滌3次,得到白色固體,50℃下減壓干燥后為0.6g,以乙酸乙酯重結(jié)晶,紅外燈下干燥至恒重,得白色粉末0.52g,mp188~189℃,即為豬膽酸，總收率為5.2%。
臨床前研究
1、曹暢等人探究外源添加豬膽酸(hyocholic acid,HCA)對高脂孕鼠體脂代謝、腸道微生物及膽汁酸代謝的影響,旨在研究豬膽酸對改善小鼠體脂代謝紊亂的作用。選取6周齡體重相近(19.2g±0.1g)、生長狀況良好的C57BL/6小鼠雌性68只和雄性23只進行配種,將孕鼠按體重隨機分為4個處理組:對照組(CON)、高脂組(T1)、高脂+50mg/kg豬膽酸組(T2)、高脂+100mg/kg豬膽酸組(T3),每組5個重復(fù),每個重復(fù)3只。分別在小鼠分娩和斷奶當(dāng)天,測定各組小鼠生長性能及血清生化指標(biāo),進行組織切片分析,并在分娩當(dāng)天取結(jié)腸內(nèi)容物進行腸道菌群和膽汁酸代謝分析。經(jīng)試驗結(jié)果表明豬膽酸可通過改善血清生化組成,促進有益菌的生成及膽汁酸代謝,從而調(diào)控由高脂飼糧誘導(dǎo)的小鼠體脂代謝紊亂,為豬膽酸在高脂飲食下改善體脂代謝紊亂提供了參考[2]。
2、高永紅等人觀察大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺血再灌注損傷細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)表達的影響,探討清開靈有效組分豬膽酸阻抑腦缺血炎癥反應(yīng)的作用途徑。在 體外培養(yǎng)大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,氧糖剝奪法模擬缺血再灌注損傷,采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色和RT-PCR方法半定量檢測ICAM-1蛋白和mRNA的表達。結(jié)果與正常組比較,模型組ICAM-1蛋白和mRNA的表達明顯增高(P＜0.01);與模型組比,豬膽酸顯著降低ICAM-1的表達(P＜0.05)。因此， 豬膽酸可能通過干預(yù)ICAM-1表達而阻抑腦缺血損傷炎癥反應(yīng)[3]。
參考文獻
[1] 安徽華印機電股份有限公司. 一種從豬膽汁中分離豬膽酸的方法:CN201310449525.9[P]. 2014-02-05.
[2] 曹暢,李玉蓮,王潔,等. 外源添加豬膽酸對高脂孕鼠體脂代謝、腸道微生物和膽汁酸代謝的影響[J]. 中國畜牧獸醫(yī),2025,52(5):1999-2011. DOI:10.16431/j.cnki.1671-7236.2025.05.006.
[3] 高永紅,袁拯忠,牛福玲,等. 豬膽酸對體外缺血再灌注大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1的影響[J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2007,30(10):670-673. DOI:10.3321/j.issn:1006-2157.2007.10.007.