簡介

依來曲普坦是一種可特異性靶向Tet1酶的小分子化合物，其可通過特異性抑制Tet1酶的催化活性（對Tet2、Tet3酶活性及Tet1/2/3的mRNA、蛋白表達(dá)無顯著影響），降低細(xì)胞內(nèi)的DNA羥甲基化水平，為DNA羥甲基化相關(guān)的表觀遺傳調(diào)控研究提供了特異性工具，也為后續(xù)探索Tet1介導(dǎo)的生物學(xué)過程提供了新的干預(yù)手段。

依來曲普坦的性狀

特異性抑制Tet1酶活性

Tet酶家族成員中的Tet1、Tet2、Tet3均能催化5mC形成5hmC，那么依來曲普坦降低細(xì)胞內(nèi)的DNA羥甲基化水平是否僅通過抑制Tet1酶活性來實現(xiàn)的呢？依來曲普坦除了抑制Tet1酶活性以外是否也影響Tet2與Tet3酶活性。為了進(jìn)一步探究依來曲普坦是否特異性抑制Tet1酶活性，首先本研究在HEK-293T細(xì)胞中進(jìn)行了實驗，分別過表達(dá)Tet1-CD、Tet1、Tet2、Tet3，轉(zhuǎn)染12小時后分別給予10μM、100μM依來曲普坦處理，繼續(xù)培養(yǎng)36小時后收樣提取DNA，通過DotBlot檢測DNA5hmC修飾水平。結(jié)果顯示，在過表達(dá)全長Tet1蛋白后，與未給藥組相比，10μM依來曲普坦對5hmC修飾水平?jīng)]有改變，但100μM依來曲普坦可顯著降低5hmC修飾水平(P<0.01)；過表達(dá)Tet2和Tet3蛋白后，與未給藥組相比，10μM與100μM依來曲普坦對5hmC修飾水平則沒有影響（圖3C-F）。由于酶活性主要由酶的催化結(jié)構(gòu)域決定，因此本研究繼續(xù)探究了依來曲普坦對Tet1-CD活性的影響。DotBlot結(jié)果顯示，在過表達(dá)Tet1-CD結(jié)構(gòu)域后，與未給藥組相比，10μM(P<0.001)和100μM(P<0.01)依來曲普坦均可顯著降低5hmC修飾水平，具有統(tǒng)計學(xué)差異，這進(jìn)一步表明，與全長Tet1相比，依來曲普坦對Tet1-CD的酶活影響更顯著。綜上所述，依來曲普坦可有效通過抑制Tet1酶活性降低細(xì)胞內(nèi)的DNA羥甲基化水平[1]。

Tet酶的活性及其表達(dá)水平均會影響羥甲基化水平。以上結(jié)果已證實依來曲普坦僅抑制Tet1酶活性，但是對Tet1、Tet2、Tet3的表達(dá)是否產(chǎn)生影響還不清楚。為了進(jìn)一步研究依來曲普坦對Tet1、Tet2、Tet3表達(dá)的影響，本研究利用10μM依來曲普坦處理HT22細(xì)胞，培養(yǎng)36小時后收樣，通過qPCR與WesternBlot分別檢測Tet1、Tet2、Tet3的mRNA與蛋白表達(dá)變化。結(jié)果顯示依來曲普坦不影響細(xì)胞內(nèi)Tet1、Tet2和Tet3的mRNA水平和蛋白水平。綜合依來曲普坦對三種Tet酶活性和表達(dá)的影響可知，依來曲普坦通過特異性抑制Tet1酶活性降低細(xì)胞內(nèi)的DNA羥甲基化水平[1]。

參考文獻(xiàn)

[1] 王文娟. Tet1抑制劑依來曲普坦在小鼠中具有抗抑郁作用[D]. 蘇州大學(xué), 2023. DOI:10.27351/d.cnki.gszhu.2023.001856.